CAT#:JW-220603
常温运输和保存，有低温成分

糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用）

产品及特点
本产品为在PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。它具有如下特点：
1.一站式，用户不要单独配制所需成分，简单快捷。
2.提供一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白，便于分析问题。
3.专一性强，通过共价修饰方式检测糖基，不检测蛋白部分。
4.快捷，只需不到2小时，而其他的染色方法需要4-5小时。
5.染色后的糖蛋白为品红色条带，背景为浅粉色或者无色
6.灵敏度高，理论上可以达到微克级别，但实际应用时灵敏度跟靶蛋白的糖基化程度相关。
7.可以用于SDS-PAGE和2D电泳的凝胶检测，也可以用于琼脂糖凝胶电泳的检测（但背景较高），还可以用于硝酸纤维素印迹膜的检测。
8.本产品足够染色10张mini-PAGE胶或20张8×8 cm的蛋白印迹纤维素膜。
9.本产品只可用于科研。
规格及成分
本产品使用大扁盒包装
成分                                                编号           规格    包装
氧化试剂                                       220603a    2.5 g       2 mL棕色管
还原试剂                                       220603c    1.25 g     2 mL本盖管
糖蛋白染色试剂                            220603b    250 mL    250 mL本色瓶
阳性对照（辣根过氧化物酶）       220603d    1 mg       0.5 mL橙盖管
阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）220603e    1 mg       0.5 mL黄盖管
250mL本色塑料瓶（空）               无                2个       无
使用手册                                      220603sc    1份       1份

运输及保存
常温运输和保存，阳性对照和阴性对照干粉需要4℃或更低温度长期保存，有效期一年。注：糖蛋白染色试剂的有效期只有半年（从出厂时间开始计算）。

自备物品
甲醇、冰醋酸、超纯水、1×SDS-PAGE上样缓冲液等。

使用方法
实验前准备
1.配制3%醋酸溶液：将30 mL自备的冰醋酸与970 mL超纯水混匀，室温保存备用。
2.配制50%甲醇溶液：将250 mL自备的甲醇与250 mL超纯水混匀，室温保存备用。
3.配制氧化试剂溶液：将本试剂盒提供的氧化试剂干粉转移到本试剂盒提供的250 mL空本色塑料瓶中，然后加入250 mL的3%醋酸溶液（第1步配制），充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液，室温保存备用。
4.配制还原试剂溶液：将本试剂盒提供的还原试剂干粉转移到本试剂盒提供的250 mL空本色塑料瓶中，然后加入250 mL的超纯水，充分混匀溶解后得到还原试剂溶液，室温保存备用。
5.配制阳性对照（辣根过氧化物酶）溶液：向装有1 mg辣根过氧化物酶固体的棕色管中加入1 mL 1×SDS-PAGE上样缓冲液（自备），所得辣根过氧化物酶溶液的浓度为1mg/mL，然后分装成100 μL/管共10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每条泳道加10 μL的阳性对照溶液即可。
6.配制阴性对照（大豆胰蛋白酶抑制剂）溶液：向装有1 mg大豆胰蛋白酶抑制剂干粉的管中加入1×SDS-PAGE上样缓冲液（自备），所得大豆胰蛋白酶抑制剂溶液的浓度为1 mg/mL，然后分装成100 μL/管共10管，留下一管当天使用，其余的放-20℃长期保存。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加10 μL的阴性对照溶液即可。
7.样品稀释：用SDS-PAGE上样缓冲液将蛋白样品浓度稀释为1 mg/mL，SDS-PAGE上样缓冲液终浓度为1×。对于80 mm×80 mm的凝胶来说，每个泳道加10 μL的样品。
凝胶染色的操作步骤（注意:请在通风橱中进行以下操作）
8.取出电泳后的SDS-PAGE凝胶，加入到装有100 mL 50%甲醇溶液的器皿中，完全浸泡30分钟后，倒出甲醇溶液。
9.用100 mL 3%醋酸溶液洗涤胶块两次，每次轻轻振荡10分钟。
10.将PAGE胶块转移到装有25 mL氧化试剂的器皿中，轻轻振荡15分钟。
11.用100 mL 3%醋酸溶液洗涤胶块3次，每次轻轻振荡5分钟。
12.将胶块转移到装有25 mL糖蛋白染色试剂的器皿中，轻轻振荡15分钟。（注：若染色试剂中有晶体析出，只需取上清液即可，不要加热溶解晶体。）
13.将胶块转移到装有25 mL还原试剂的器皿中，轻轻振荡5分钟。
14.用3%醋酸溶液洗涤胶块，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%醋酸溶液中。
硝化纤维素膜染色的操作步骤（注意:请在通风橱中进行以下操作）
15.用20 mL 3%醋酸溶液洗涤膜两次，每次轻轻振荡10分钟。
16.将膜转移到10 mL的氧化试剂中，轻轻振荡15分钟。
17.用10 mL 3%醋酸溶液洗涤膜3次，每次轻轻振荡5分钟。
18.将膜转移到10 mL的糖蛋白染色试剂中，轻轻振荡15分钟。注意：若染色试剂中有晶体析出，只需离心取上清液去除晶体即可，不要加热来溶解晶体。
19.将膜转移到10 mL还原试剂中，轻轻振荡5分钟。
20.用3%醋酸溶液洗涤膜，然后用超纯水洗涤至显色，糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%醋酸溶液中。
21.检测后如果没有条带，可以用转膜后的PAGE胶进行检测，因为糖蛋白（尤其是高度糖基化的蛋白）转膜效果比较差。

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