CAT#:JW-220521-50
常温运输和保存

液体样品DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品专门用于从血清(血浆)等液体样品及拭子（咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、阴道拭子等）挤出液中提取微量DNA的产品，它具有下列特点：
1.操作简单，整个过程只需要20分钟左右。
2.不需要额外在洗柱液中补加乙醇。
3.灵敏度高，通过PCR检测到的最终灵敏度可以达到50拷贝/mL以下。
4.安全无毒，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
5.如果加上病毒离心富集步骤，最多可以处理1.5 mL液体病毒样品。
6.与PCR和荧光PCR兼容。
7.价廉物美，性价比远高于国外同类产品。
8.适用于各种材料，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、粪便、培养细胞上清液等无细胞材料。
9.本产品足够50次微量提取。
10.本产品只能用于科研。

规格及成分
成分                                                编号        规格       包装
液体样品DNA裂解液                    220521a    30mL    30mL本色瓶
上柱结合液                                  990602      40mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                                 220144       50套     塑料袋
通用洗柱液                                 220143       50mL    60mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯专用）    220125      10mL    10mL本色瓶
使用手册                                    220521sc    1份                无
本产品用小扁盒包装

运输及保存
温运输及保存，DNA病毒裂解液长期（1月以上）放置时需要放4℃，有效期一年。

自备试剂
生理盐水， 1.5 mL Nase-free离心管

使用方法
1.如果有N个样品，标记N+2个1.5-2 mL螺旋盖塑料离心管(如Sarstedt CAT#:JW-782.694.006)，多出的一个为阳性对照，一个为阴性对照。为避免污染，建议不要使用压盖式塑料离心管。在每个管上做个标记，以在后续操作时区别向心面和离心面。然后在离心管中分别加入0.2 mL液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等等），阳性对照和阴性对照。
1.1、如果是口腔拭子、咽喉拭子等各种拭子样品，则将拭子放入0.2mL自备生理盐水中挤压出液体，然后取0.2mL进行提取。
1.2、如果是粪便等半固定样品，则取约0.3mL的样品，加入0.3mL自备生理盐水，震荡重悬，离心取0.2mL上清进行提取。
1.3、如果血液，细胞培养液等含细胞的液体，可以离心后使用上清。血浆的抗凝剂必须是EDTA或ACD，不能是肝素，否则肝素会抑制PCR。使用ACD时由于所加入ACD会增加体积，样品会被稀释，得到的病毒滴度会比使用EDTA低15%左右。血浆最好按0.6mL/管的量分装保存，以避免反复冻融。
1.4、如果样品是实体组织或培养细胞，则需要在自备生理盐水中匀浆后离心，取0.2mL上清液（含病毒）进行提取，但此种情况下最后得到的液体DNA不可避免的会含有少量基因组DNA污染（但不影响PCR检测）。
1.5、如果富集液体样品中的病毒，可以使用1.5 mL上述方法得到的液体在4℃ 24,000 g冷冻离心60分钟, 移弃1.3 mL、用剩下的0.2mL继续操作。
2.加入0.6 mL液体样品DNA裂解液到各离心管中，振荡30秒混匀后室温放置10分钟裂解病毒。注意：液体样品DNA裂解液在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
3.加入0.8mL上柱结合液到离心管中，颠倒混匀后转移一半的混合液（0.8mL）到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
4.12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
5.将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
6.12,000 rpm室温离心1分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
7.加入0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。
8.加入0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12,000 rmp室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液，把离心吸附柱放回到收集管中。此为第二次洗涤，可以跳过。
9.12,000 rpm室温离心半分钟（干甩），弃含穿透液的离心管。
10.将干甩后的离心吸附柱套入到一个自备的1.5 mL RNase-free 离心管中，在离心吸附柱的滤膜的中部加入30-100 uL DNA洗脱液（基因组纯化专用），然后室温放置2分钟。
11.12,000 rpm室温离心1分钟，离心管中的溶液即为病毒期保存。

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