CAT#:JW-220515-50
常温运输和保存，有2个低温成分

植物RNA提取试剂盒（过柱法，含RNase-free DNase）

产品及特点
本产品是在植物RNA纯化试剂盒（过柱法）基础上改进得产品，它整合了柱式原位DNase的消化步骤，用于去除植物基因组DNA污染，提取的RNA通过PCR验证不含基因组DNA污染。该产品特点如下：
1.操作简单快速，处理一个样品只需要约十几分钟。
2.所得RNA的OD260/280一般都在2.0左右。
3.能够有效去除多糖、多酚和基因组DNA的污染。
4.所提取RNA不含基因组DNA污染（电泳及PCR均检测不到）。
5.得到的RNA可直接用于RT-PCR、RT-LAMP、Northern杂交、cDNA合成等实验。
6.性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
7.本试剂盒不能用于miRNA的纯化。
8.本产品足够50次微量提取。

规格及成分
本产品用大纸盒包装
成分                                                编号       规格        包装材料
植物RNA纯化溶液A                    220514a    50 mL    60mL本色瓶
植物RNA纯化溶液B                    220514b    15 mL    15mL本色瓶
植物RNA纯化溶液C                    220514c    50 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                                  220144     50套        塑料袋
通用洗柱液                                  220143     50 mL×2    60mL本色瓶
RNase-free DNase（5U/uL）     220173a    0.1mL       0.5mL红盖管
10×硅胶模DNase反应液             220173b    0.25 mL    0.5mL绿盖管
RNA洗脱液                                 71207         10 mL     10 mL本色瓶
使用手册                                    220515sc    1份                   无

运输及保存
常温运输和保存，但RNase-free DNase 和硅胶膜DNase反应液需要-20℃保存，有效期一年

自备试剂
氯仿

使用方法
1.准备材料。每次微量提取一般需要100-200 mg植物叶片、或50-100 mg植物种子、或200-500 mg植物果实。
2.样品破碎：
匀浆法：先将新鲜植物组织用剪刀剪成小块，放入10-15 mL塑料离心管中，加入1 mL植物RNA纯化溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。将1mL匀浆液转移到1.5mL的塑料离心管中，有的植物组织（比如果实）含有大量水份，匀浆液会多于1 mL，转移时也只取1 mL。。注意：植物RNA纯化溶液A 4℃放置时可能会产生沉淀，用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到1.5mL的塑料离心管中，加入1 mL植物RNA纯化溶液A，立即剧烈振荡20秒，充分混匀。
3.在装有1mL匀浆液或研磨物的离心管中加入0.3 mL的植物RNA纯化溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温13000 rpm离心3-5分钟，两相间将有约5毫米厚的细胞破碎物。
5.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。
6.加入跟上清液等体积的植物RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些植物，属于正常现象），千万不要去掉沉淀。
7.将一半的混合液（包括沉淀物）转移到离心吸附柱中，13000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8.将剩下的一半的混合液（包括沉淀物）转移到同一离心吸附柱中，13000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
9.加0.7mL通用洗柱液，13000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，13000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
10.13000 rpm室温离心10秒以便去除残留液体。此步很重要，否则残留的通用洗柱液会抑制后续反应中DNase的活性。
11.配制DNase硅胶模工作液：将2uL（10 U）本试剂盒提供的RNase-free DNase，5uL 10×硅胶模DNase反应液和43uL RNA洗脱液混合，共50uL。
12.将DNase工作液全部50uL加入到离心吸附柱中，室温放置10-30分钟。
13.直接在离心吸附柱中加0.7 mL通用洗柱液。
14.13000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
15.再加0.3 mL通用洗柱液到离心吸附柱中，13000 rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
16.13000 rpm室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇（通用洗柱液中的成分）会影响RNA的使用。
17.将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50 uL RNA洗脱液，室温放置2分钟。
18.13000 rpm室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品。
19.所得RNA溶液可以立即使用或存放于-80℃待用。如果要进行甲醛变性电泳检测。如果使用非变性胶电泳，则必须使用RNA专门的上样液。千万不能使用DNA上样液（因为它一般没有经过去RNase处理）。

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