CAT#:JW-220514-50
常温运输和保存

植物RNA提取试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品是本公司根据很多植物多糖多酚的特点而专门开发的RNA纯化试剂盒，其提取纯化效果在100多种各类植物中得到验证。该产品特点如下：
1.操作更加简单快速，处理一个样品只需要约10分钟。
2.所得到的RNA OD260/280平均在2.0左右。
3.含有专门去除多糖和多酚的成分，污染残留少。
4.得到的RNA可直接用于RT-PCR、RT-LAMP、Northern杂交、cDNA合成等后续实验。
5.性价比高于进口的柱式植物RNA提取产品。
6.本产品不适合纯化植物小RNA。

规格及成分
本产品采用大纸盒包装
成分        编号    规格    包装材料
植物RNA提取溶液A    220514a    50 mL    60 mL本色瓶
植物RNA提取溶液B    220514b    15 mL    15 mL棕色玻璃瓶
植物RNA提取溶液C    220514c    50 mL    60 mL本色瓶
离心吸附柱    220144    50套    塑料袋
通用洗柱液    220143    50 mL    60 mL本色瓶
RNA洗脱液    971207    10 mL    10 mL本色瓶
使用手册        220514sc    1份    1份

运输及保存
常温运输和保存，溶液B需要4℃保存，有效期一年。

自备试剂
氯仿。

使用方法
注意：植物RNA提取溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后才能取用。
1.每次微量提取需要100-200 mg植物叶片、或50-100 mg植物种子、或200-500 mg植物果实。
2.样品破碎：
1)匀浆法：先将新鲜植物组织剪切成小块，放入10-15 mL塑料离心管中，加入1 mL植物RNA提取溶液A，然后用Polytron剪切式匀浆器匀浆5-20秒，然后见匀浆液转移到1.5 mL塑料离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。不能用玻璃的、分离线粒体和叶绿体的匀浆器。
2)液氮研磨法（适用于复杂，易降解样品）：取适量新鲜植物组织放入含液氮的研钵中，迅速将组织研磨成粉末后，将粉末转移到1.5 mL的塑料离心管中，加入1 mL植物RNA提取溶液A，立即剧烈振荡20秒，充分混匀。
3.在装有匀浆液或研磨物的1.5 mL离心管中加入0.3 mL的植物RNA提取溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温13,000×g离心5分钟，两相间将有约5-10 mm厚的细胞破碎物。
5.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。
6.加入等体积的植物RNA提取溶液C，充分颠倒混匀。如果有沉淀产生（对某些植物，属于正常现象），千万不要去掉沉淀。
7.将一半的溶液（如果有沉淀，则先混匀后一起取用）转移到离心吸附柱中，13,000×g室温离心半分钟，弃穿透液。
8.将剩下的一半溶液（如果有沉淀，则先混匀后一起取用）转移到同一离心吸附柱中，13,000×g室温离心半分钟，弃穿透液。
9.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。再加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的洗柱液会影响RNA的使用。
11.将离心吸附柱转移到一个自备的干净的RNase-free收集管中，加入50 μL RNA洗脱液，室温放置1分钟。
12.13,000×g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13.RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。如果电泳发现DNA污染严重（跟样品相关）建议使用含有RNase-free DNase处理步骤的植物RNA纯化试剂盒（过柱法，含DNase），也可以另购RNase-free DNase降解DNA。
14.RNA产量产率测定：将1μL RNA跟1uLTE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)混合，然后在NanoDrop上测其在OD260的光吸收和浓度，进而计算出RNA的产量（浓度×体积)和产率(RNA产量/植物组织用量)。
15.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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