CAT#:JW-220513-50
常温运输和保存

DNA溶液内毒素清除剂

产品及特点
革兰氏阴性细菌（如大肠杆菌）的细胞表面的结构成分LPS（lipopolysaccharides，脂多糖）就是内毒素，因此纯化的革兰氏阴性细菌基因组DNA和质粒DNA中几乎都有内毒素污染。内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用，这也是为何被叫做内毒素的原因。因此去除DNA样本中的内毒素具有重要的意义，本产品就是专门用于高效去除DNA样品中的内毒素污染的试剂，它具有下列特点：
1.简单快速，一次处理只需要30分钟左右，不需要复杂仪器设备。
2.高效，一次处理可以去除90%以上的内毒素，经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到0.2 EU (Endotoxin Unit，约0.1 ng LPS)/mL以下。
3.不影响DNA的活性和完整性，处理过的DNA可以直接用于活体细胞科研或活体生物科研，也可以用于常规的分子生物学研究。
4.适用范围广，可用于处理各种来源的DNA（基因组DNA和质粒DNA）和各种形状的DNA（单链和双链，线状和环状）。
5.既可小规模使用（在1.5 mL离心管内），也可放量使用。
6.本产品提供的试剂足够进行50次处理（每次处理300 mL样本，每个样本处理三次）。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用塑料袋包装
成分                                               编号    规格       包装
DNA溶液内毒素清除溶液A    220513a    1.5 mL    1.5 mL白盖管
DNA溶液内毒素清除溶液B    220513b    1.5 mL    1.5 mL蓝盖管
使用手册                               220513sc    1份       无

运输及保存
常温运输和保存，有效期两年。

自备试剂
TE、无水乙醇、75%乙醇。

使用方法
一：微量处理（用于体积小于300 mL样品）
1.在一干净的1.5 mL的塑料离心管中加入浓度在0.1-1 mg/mL的300 mL的待处理DNA样品（来于基因组DNA提取和质粒DNA提取）。如果体积不足300 mL，可以用自备的TE补足到300 mL。如果浓度不到此范围，可以用本公司的核酸浓缩剂浓缩或乙醇沉淀后再用小体积TE溶解。
2.加入30 mL DNA溶液内毒素清除溶液A。
3.加入10 mL DNA溶液内毒素清除溶液B，涡旋振荡器充分震荡1分钟混匀。
4.台式摇床上室温摇晃20分钟。
5.再放置到金属浴上50℃保温10分钟。
6.台式离心机室温13000-15000×g 离心3分钟，离心后上层为无色透明，下层为淡蓝色。注意：此步不能低温离心。
7.小心将上清（含DNA）转移到新的离心管中，注意不要吸取下层（含内毒素）的液体。
8.此上清液就是去除内毒素后的DNA溶液，留样少许，剩下的样品可以重复3-7步两次，最后比较三次处理得到的DNA溶液的残留内毒素含量，并据此确定今后处理此类DNA溶液所需要的抽提次数。一般对内毒素污染严重的DNA溶液（含1000 EU左右的），需要抽提三次。如果起始含量低的，可能只需要一次。
9.加入自备的两倍体积的无水乙醇，混匀后13000-15000×g 离心5分钟。
10.小心吸弃上清。
11.加入1mL自备的75%乙醇，颠倒3次。
12.13000-15000×g 离心2分钟。
13.小心吸弃上清。
14.13000-15000×g 离心10秒。
15.小心吸弃残留上清（约50 mL）。
16.加入适量的TE溶解DNA沉淀。
17.测试残留内毒素的含量。如果内毒素含量已经减低到可以接收的水平，则可将DNA溶液用于各种后续实验，包括酶切电泳，活性检测，处理培养细胞，打入活体实验动物等。注意：本产品只能用于科研，故不能将得到的DNA打入人体。

二：用于体积大于500 mL的DNA样品
18.整个操作同上，只是在15或50 mL塑料离心管中进行，离心速度不能超过离心管的承受力。

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