CAT#:JW-220566-100
低温运输，-20℃保存

高效核酸杂交液（含甲酰胺）

产品及特点
核酸杂交一般是指用一种标记的核酸探针与印迹膜上的核酸进行杂交，由此检测印迹膜上是否存在与探针同源的核酸分子（靶分子)。核酸杂交是分子生物学的基本技术之一，应用非常广泛。其中的RNA-RNA和RNA-DNA杂交由于Tm较高，所以需要较高的杂交温度，而杂交温度高，RNA又容易降解，所以本公司开发了本产品。它有如下特点：
1.能降低杂交温度到42℃，在保证杂交特异性的同时，减少RNA探针或RNA模板的降解，尤其适用于探针或/和模板为RNA的杂交。
2.不需要专门计算Tm，统一用42℃的杂交温度，简化操作。
3.也可以用于DNA-DNA杂交，只是DNA在正常杂交温度68℃左右，并不容易降解，一般不需要刻意降低杂交温度。
4.由于大幅降低了杂交温度，而Oligo杂交（探针或模板为Oligo的）Tm本来就低，所以Oligo杂交时慎用。
5.既可以用于同位素探针的杂交，也可用于非同位素探针的杂交。
6.除甲酰胺外，还含多种能够促进杂交的聚合物，使杂交反应能在6-12小时完成，而常规杂交反应一般需要12-24小时。
7.含多种封堵剂，能阻印迹膜对探针分子的非特异性吸附，能有效降低背景信号，延长曝光时间以便检测到低拷贝的RNA和单拷贝基因。
8.跟各种常用的印迹膜兼容，包括硝酸纤维素膜和尼龙膜。
9.本产品只可用于科研。

规格及成分
成分                                                编号    规格    包装
高效核酸杂交液（含甲酰胺）    220566    100 mL    125mL本色瓶
使用手册                                    220566sc    1 份    无
本产品采用塑料袋包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备物品
印迹膜、标记探针、6×SSC、2×SSC、0.1×SSC。

使用方法
本产品为高盐溶液，低温下产生沉淀，必须在65℃加热溶解并充分摇匀后才能使用。
一、预杂交
1.预杂交就是用不含探针的本产品跟印迹膜进行孵育，其目的是用所含的非特异性DNA分子(鲑精DNA或小牛胸腺DNA)及其它高分子化合物将印迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭，否则这些位点会吸附标记的探针，造成高背景。
2.将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的6× SSC溶液中，使其充分湿润。
3.将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中（塑料袋最好预先封口，再剪掉一角，留一个小口)，按每平方厘米印迹膜加0.2 mL本产品的比例沿小口加入本产品，然后用塑料封口机将口封牢。
4.将此塑料袋浸没入水浴中或杂交炉中，42℃保温1-2小时，延长到12-16小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停的摇动状态中，使超级杂交液与印迹膜充分接触。

二、杂交
5.加入单链探针。如果标记的探针是双链，则先在沸水浴中加热5分钟，然后迅速置冰浴中5分钟，然后再使用。探针的加入量视探针标记效率而定，一般要求终浓度不能低于1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷贝基因，探针的加入量应加大，而对于检测克隆的基因片段，则探针的量可减少。如果是放射性探针，应将此塑料袋套在另一塑料袋之中，以避免杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
6.在42℃继续保温6-12小时。

三、洗膜
7.洗膜是洗去非特异结合的探针分子，留下特异结合的探针分子。由于非特异性杂交的杂交分子解链温度较低，热稳定性较差，在一定的温度和较低的离子强度下，即可优先洗掉。故此温度需要用户自行摸索。由于印迹膜干燥后非特异结合的探针很难洗脱，造成高背景，故洗涤过程中一定要让印迹膜保持湿润。
8.杂交完毕，取出塑料袋并剪去一角，倒出所有的含探针的杂交液。此含探针的杂交液可以多次使用，可放-20℃保存。
9.彻底剪开杂交袋，用镊子取出印迹膜，浸没于大量的2×SSC溶液中，室温下振荡漂洗15分钟。
10.换新的2×SSC溶液重复上步操作一次。
11.将印迹膜转移至0.1×SSC溶液中，在选定的洗膜温度下振荡漂洗30分钟至1小时。首次洗涤可以选择常温。如果背景高，再逐渐提高洗涤温度。
12.换新0.1×SSC溶液后重复上步操作一次。如果是同位素标记探针，则需要重复至用盖革计数器在无核酸区域检测不出放射信号为止。
13.将印迹膜转移到滤纸上，吸去表面液体后印迹膜即可用于后续检测（如化学发光、放射自显影，取决于探针的标记方式）。

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