细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒产品说明书
 
主要用途
 细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂是一种旨在通过特异性 DNA  活性染料特异性地使固 着处理的核酸物质立刻染色，呈现点状或杆状的非核 DNA  蓝色荧光的权威而经典的技术方法。该技术由 大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物细胞培养的支原体定性检测。产品严 格无菌，即到即用，性能稳定，检测敏感，荧光清晰。

技术背景
支原体(mycoplasma)属于柔膜细菌目(Mollicutes)，是最小(0.2至2微米)也是最简单(580至2200kbp) 的寄生类生物。其缺乏肽聚糖(peptidoglycan)细胞壁。支原体是人体非典型型肺炎的病原体。由于支原  体具有青霉素和链霉素抗性、无法通过过滤去除，成为细胞培养中常见的污染微生物：改变细胞表型和生 长特征。赫斯特染料(Hoechst 33258)为特异性 DNA  活性染料，与 A-T  键结合，这种染料对固着处理 的核酸可立即染色。细胞培养污染性支原体荧光染色技术， 通过Hoechst 33258DNA染色， 替代支原体培养 技术，具有快速原位检测细胞培养中支原体的存在，即细胞核外DNA或细胞外DNA的染色阳性，  在荧光 显微镜下(激发波长360nm，散发波长490nm)下观察到蓝色点状(dots)或杆状(rods)。

产品内容
清理液(Reagent A)    毫升
固着液(Reagent B)    毫升
染色液(Reagent C)    毫升
封片液(Reagent D)    毫升
产品说明书    1 份

保存方式
保存 固着液(Reagent B)和 染色液(Reagent C)在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃ 冰箱里； 固着液(Reagent B)确保瓶盖密闭； 染色液(Reagent C)，避免光照，有效 保证 6 月

用户自备
微型台式离心机：用于悬浮细胞操作
细胞培养板或培养皿：用于培养细胞的容器
荧光显微镜：用于观察荧光染色情况

实验步骤
一、  贴壁细胞培养检测
1．  准备好待测细胞培养至 50％铺满率(注意： 建议使用无抗生素细胞培养液)
2．  小心抽掉细胞培养容器里的培养液
3．  轻轻加入适量的 清理液(Reagent A) 到每个培养孔里(见下表)
培养容器    容量
96 孔板    毫升
48 孔板    毫升
24 孔板    毫升
12 孔板    毫升
6 孔板    毫升
25cm2    毫升
4．  小心抽去清理液
5．  小心加入适量的 固着液(Reagent B) 到每个培养孔里(见实验步骤 2 表)
6．  室温下孵育 10 分钟
7．  小心抽去固着液
8．  重复实验步骤 5 至 7 一次
9．  小心加入适量的 染色液(Reagent C) 到每个培养孔里(见下表)
培养容器    容量
96 孔板    微升
48 孔板    微升
24 孔板    微升
12 孔板    毫升
6 孔板    毫升
25cm2    毫升
10．在室温下，暗室里孵育 30 分钟(注意： 避免液体蒸发而干枯)
11．小心抽去染色液
12．小心加入适量的 清理液(Reagent A) 到每个培养孔里(见实验步骤 2 表)
13．小心抽去净化液
14．小心加入适量的 封片液(Reagent D) 到每个培养孔里(见实验步骤 9 表)
15．置于荧光显微镜下观察染色情况(400 至 1000 倍放大倍数)：激发波长 360nm，散发波长 490nm 胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等蓝色荧光

二、 悬浮细胞培养检测
1．  将待测悬浮细胞(1 X 105 总量)移入到 2 毫升离心管
2．  放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
3．  小心抽去上清液
4．  加入XX毫升 清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群
5．  放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
6．  小心抽去上清液
7．  加入XX毫升 固着液(Reagent B)，混匀细胞颗粒群
8．  室温下孵育 10 分钟
9．  放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
10．小心抽去上清液
11．重复实验步骤 7 至 10 一次
12．加入XX毫升 染色液(Reagent C)，混匀细胞颗粒群
13．室温下，暗室里孵育 30 分钟
14．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
15．小心抽去上清液
16．加入XX毫升 清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群
17．放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 500g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
18．小心抽去上清液
19．加入XX微升 清理液(Reagent A)，混匀细胞颗粒群
20．移取 20 微升到载玻片上
21．空气中晾干
22．加入XX微升 封片液(Reagent D)
23．封片
24．即刻置于荧光显微镜下观察染色情况(400 至 1000 倍放大倍数)：激发波长 360nm，散发波长 490nm 胞浆内或细胞外呈现点状、杆状、散粒、纤丝状等蓝色荧光

注意事项
1 ．  本产品为 20 次(24 孔板)、50 次(48 孔板)、100 次(96 孔板)操作
2 ．  操作时须戴手套
3 ．  操作时，严格无菌操作
4 ．  3T6 、vero 、L292 细胞为支原体易感性细胞
5 ．  建议使用 1 至 3 次无抗生素培养传代的待测细胞
6 ．  试剂瓶务必密封保存
7 ．  染色液(Reagent C) －20℃低温保存
8 ．  染色时，避免光照
9 ．  细胞染色前后的清洗过程中，小心操作，以免将细胞冲洗掉
10 ．阳性图像可见蓝色发亮的核染色；标准支原体染色见下图：
11．如果有真菌和细菌污染，可见较大的菌体染色
12．本公司提供系列细胞培养试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息        
编号        名称                    规格
G&VS10088.2    细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒        20/100 次
G&VS10088.2A    清理液(Reagent A)                100 毫升
G&VS10088.2B    固着液(Reagent B)                100 毫升
G&VS10088.2C    染色液(Reagent C)                100 毫升
G&VS10088.2D    封片液(Reagent D)                100 毫升
G&VS10088.1    细胞培养污染性支原体鉴定 16S－23SrDNAPCR 扩增检测试剂盒    20 次

产品编号        名称                规格
G&VS12049. 1    DMEM 细胞培养基            500 毫升
G&VS12049.2    RPMI 1640 细胞培养基        500 毫升
G&VS12024. 1    胰蛋白酶(0.05%)乙二胺四乙酸混合液    100 毫升
G&VS12024.2    胰蛋白酶(0.25%)乙二胺四乙酸混合液    100 毫升
G&VS12024.3    乙二胺四乙酸(EDTA)细胞脱离溶液    100 毫升
G&VS12028. 1A    Hanks 平衡盐缓冲溶液(HBSS)        500 毫升
G&VS12028. 1B    Hanks 钙镁平衡盐缓冲溶液(HBSS)    500 毫升
G&VS12028.2    10 倍 Hanks 平衡盐缓冲溶液(HBSS)    500 毫升
G&VS12033. 1A    标准磷酸平衡盐(PBS)缓冲溶液        500 毫升
G&VS12033. 1B    钙镁磷酸平衡盐(PBS)缓冲溶液        500 毫升
G&VS12033.2    10 倍磷酸平衡盐(PBS)缓冲溶液(0.1 M)    500 毫升
G&VS12050    青链霉素混合液            100 毫升
G&VS12051    精制胎牛血清            500 毫升
G&VS12063    胚胎干细胞(ES)基础培养基        500 毫升
G&VS12064    小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)完全培养基    500 毫升
G&VS12199. 1    人体胚胎干细胞完全培养基        100 毫升
G&VS12199.2    小鼠胚胎干细胞完全培养基        100 毫升
G&VS12199.3    大鼠胚胎干细胞完全培养基        100 毫升
G&VS10071    滋养细胞法胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS10072. 1    明胶法人体胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS10072.2    明胶法小鼠胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS10072.3    明胶法大鼠胚胎干细胞繁殖试剂盒    10 次
G&VS12110    胰蛋白酶中和液            100 毫升
G&VS10058    细胞培养细菌污染定性荧光检测试剂盒    20 次
G&VS10068    动物肝星状细胞分离培养试剂盒        5 次
G&VS10069    细胞培养病毒污染溶斑法结晶紫染色试剂盒    20 次
G&VS10070    细胞培养病毒污染溶斑法中性红染色试剂盒    20 次
G&VS10088. 1    细胞培养污染性支原体鉴定 16S－23SrDNAPCR 扩增检测试剂盒    20 次
G&VS10088.2    细胞培养污染性支原体荧光染色鉴定试剂盒    20/100 次
G&VS10089    细胞培养抗支原体污染试剂盒        10 次