细菌氧化应激活性氧（ROS）超氧阴离子（superoxide）比色法（NBT）定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
细菌氧化应激活性氧（ROS）超氧阴离子（superoxide）比色法（NBT）定量检测试剂是一种旨在通过硝基蓝四氮唑染料，受到超氧阴离子O2-的还原，产生不溶性蓝黑色色素沉淀，呈现吸光峰值的变化，即采用比色法定量检测细菌细胞内超氧阴离子活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种细菌样品的超氧阴离子活性氧族的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。染料四氮唑兰（tetrazolium）化合物，包括硝基蓝四氮唑（Nitro Blue Tetrazolium；NBT）和二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），一旦受到超氧阴离子O2-的直接还原，便产生不溶性甲暨色素，在分光光度仪下（650nm波长），呈现吸光峰值的变化。据此定量检测细菌细胞内超氧阴离子活性氧族的浓度。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
缓冲液（Reagent B）        毫升
染色液（Reagent C）        毫升
溶解液（Reagent D）        毫升
产品说明书                        1份

保存方式
保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent C），严格避免光照和室温空气中久置；有效保证3月

用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
孔板离心机：用于96孔板离心操作
比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤
一、样品准备
1．准备好1毫升（1 X 109细菌/毫升）的待测样品
2．放进4℃微型台式离心机离心2分钟，速度为10000g
3．小心抽去清理液
4．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细菌颗粒群
5．放进4℃微型台式离心机离心2分钟，速度为10000g
6．小心抽去清理液
7．加入xx毫升缓冲液（Reagent B），混匀细菌颗粒群
8．放进冰槽里待测

二、测定准备
1．准备好待测样品，置于冰槽里备用
2．设定好分光光度仪或酶标仪：580nm波长，并置零

三、样品测读
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于室温下融化，避免光照。然后进行下列操作。
1．准备1个96孔板，做好标记：空白对照和待测样品
2．移取xx微升缓冲液（Reagent B）到空白对照孔里
3．移取50微升上述准备的待测样品到待测样品孔里
4．分别加入xx微升染色液（Reagent C）
5．轻轻摇动96孔板，使其混匀
6．放进37℃培养箱里孵育30分钟
7．（选择步骤）放进孔板离心机离心5分钟，速度为3000g
8．（选择步骤）小心抽去上清液
9．（选择步骤）分别加入xx微升溶解液（Reagent D），混匀
10．（选择步骤）室温下孵育5分钟
11．即刻放进酶标仪里测读：获得吸光读数（OD）
12．构建生成曲线：纵座标（Y轴）为吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数、时间点或药物处理浓度等
13．计算样本浓度

注意事项
1．本产品为20次操作
2．操作时，须戴手套
3．样品制备的所有操作均须在4℃状态下进行
4．测试前，样品须新鲜收集
5．样品须清澈
6．样品避免含有Tris、EDTA和还原剂等
7．可以使用100微升1厘米光径比色皿检测。注意计算公式光径距离的修正
8．如果样品浓度过低，反应孵育时间可以延长至1小时
9．如果样品浓度过高或过低， 建议稀释或增加样品浓度
10．本公司提供系列活性氧分析试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号                               名称                                                                                    规格        
G&VS10067.7        细菌氧化应激活性氧超氧阴离子比色法定量检测试剂盒            20次        
G&VS10067.7A     清理液（Reagent A）                                                                毫升
G&VS10067.7B     缓冲液（Reagent B）                                                                毫升
G&VS10067.7C     染色液（Reagent C）                                                                毫升
G&VS10067.7D     溶解液（Reagent D）                                                                毫升
 
试剂盒订购信息
产品编号                        名称                                                                                                                            规格
G&VS10067.1    活体细胞氧化应激活性氧（ROS）原位染色（NBT）试剂盒（超氧阴离子）                       100次
G&VS10067.2    冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）原位染色（NBT）试剂盒（超氧阴离子）                        50次
G&VS10067.3    活体细胞氧化应激活性氧（ROS）原位比色法（NBT）定量检测试剂盒（超氧阴离子）      100次
G&VS10067.4    细胞培养液氧化应激活性氧（ROS）比色法（NBT）定量检测试剂盒（超氧阴离子）          100次
G&VS10067.5    植物氧化应激活性氧（ROS）比色法（NBT）定量检测试剂盒（超氧阴离子）                     20次
G&VS10067.6    真菌/酵母氧化应激活性氧（ROS）比色法（NBT）定量检测试剂盒（超氧阴离子）             20次
G&VS10067.7    细菌氧化应激活性氧（ROS）比色法（NBT）定量检测试剂盒（超氧阴离子superoxide）    20次