动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒产品说明书

主要用途
动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂是一种旨在从动物肌肉组织中分离出完整而纯化的三联体组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物肌肉组织（人体、老鼠、兔子等的心脏、骨骼肌）的肌质网三联体的制备。可以被用于肌肉收缩机制、信号传递、钙离子通道、蛋白组学和细胞生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量和纯度俱佳。

技术背景
心肌和骨骼肌的肌质网（sarcoplasmic reticulum；SR）细胞器组分是由两种特征性的膜结构系统组成：来自于内质网的纵小池（longitudinal cisternae）和包括三连体（triad）、肌纤维膜管性内褶形成的横小管（T tubules）。三联体是由三种膜性结构，即2个终端小池（terminal cisternae）紧密面向并连接横小管，构成接合区间（junctional region）。哺乳动物的三联体位于肌节（sacromere）的A和I带之间区域。三联体内不含有线粒体、游离细胞膜（plasmalemma）和收缩性元素（contractile element）。三联体实施信号传导活动，包括质膜的去极化和内陷（invagination）、电荷跨膜运动、钙离子释放等，完成刺激-收缩偶联（excitation-contraction coupling）。 三联体的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过差速离心获得膜性组分；第三，通过等密度离心获得丰富密集的三联体。
 
产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
裂解液（Reagent B）        毫升
离心液A（Reagent C）    毫升
离心液B（Reagent D）    毫升
离心液C（Reagent E）    毫升
离心液D（Reagent F）    毫升
离心液E（Reagent G）    毫升
离心液F（Reagent H）    毫升
离心液G（Reagent I）    毫升
保存液（Reagent J）        毫升
产品说明书        1份                                             
保存方式
保存在4℃冰箱里，严格无菌操作；有效保证6月

用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
2毫升离心管：用于样品操作的容器
4℃台式离心机：用于样品操作
4℃超速离心机：用于样品操作
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

实验步骤
1．手术取出动物组织，去除脂肪组织和肌筋组织，秤重以确定3克组织重量
2．（选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．即刻用刀片切碎组织
5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6．加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
7．涡旋震荡5秒，充分混匀
8．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
9．在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）（注意：参见注意事项5）
10．将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管
11．放进4℃台式离心机离心20分钟，速度为9000g
12．小心移取上清液到新的超速离心管
13．放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g
14．小心抽去上清液
15．加入xx毫升预冷的裂解液（Reagent B），混匀
16．轻柔缓慢混匀颗粒群
17．准备一个20毫升超速离心管
18．移取xx毫升的离心液A（Reagent C）到20毫升超速离心管
19．移取xx毫升的离心液B（Reagent D）在离心液A（Reagent C）的上面，避免震动
20．移取xx毫升的离心液C（Reagent E）在离心液B（Reagent D）的上面，避免震动
21．移取xx毫升的离心液D（Reagent F）在离心液C（Reagent E）的上面，避免震动
22．移取xx毫升的离心液E（Reagent G）在离心液D（Reagent F）的上面，避免震动
23．移取xx毫升的离心液F（Reagent H）在离心液E（Reagent G）的上面，避免震动
24．移取xx毫升的离心液G（Reagent I）在离心液F（Reagent H）的上面，避免震动
25．轻轻加入xx毫升样品混匀液在离心液G（Reagent I）的上面，避免震动
26．放进4℃超速离心机离心90分钟，速度为100000g
27．小心取出超速离心管：可见离心液C（Reagent E）和离心液D（Reagent F）的交界面以及离心液D（Reagent F）和离心液E（Reagent G）的交界面浅棕色样品带
28．小心收集三联体样品带到2毫升离心管——此步骤获得三联体样品
29．加入xx至xx毫升保存液（Reagent J）
30．放进4℃超速离心机离心30分钟，速度为100000g
31．小心抽去上清液
32．加入xx微升保存液（Reagent J），轻柔缓慢混匀颗粒群
33．放进－70℃冰箱里保存

注意事项
1．本产品为10次（3克动物组织/次）操作
2．用户根据实际需要，调整试剂用量
3．所有操作均须在4℃或以下状态进行
4．操作时，须戴手套
5．操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）、分离液A-G（Reagent C-I）和保存液（Reagent J）
6．建议使用足够的样品量
7．建议严格控制操作时间
8．通常匀化次数为80下达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织类型会存在差异。用户可以通过显微镜观察3微升匀浆物的组织细胞裂解程度：完整细胞呈现发亮的圆环。低于50％可以增加匀化次数
9．通常1克动物组织的三联体含量为250微克蛋白
10．本产品所获得的三联体的纯度达50%
11．三联体的标志酶活性检测，建议使用组织腺苷酸环化酶（Adenylate Cyclase）活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒—G&VS50442.2
12．本公司提供系列肌质网分析试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定分离的横小管维持正常活性
3．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号        名称                    规格        
G&VS10066.5    动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒        10次
G&VS10066.5A    清理液（Reagent A）                毫升
G&VS10066.5B    裂解液（Reagent B）                毫升
G&VS10066.5C    离心液A（Reagent C）            毫升
G&VS10066.5D    离心液B（Reagent D）            毫升
G&VS10066.5E    离心液C（Reagent E）            毫升
G&VS10066.5F     离心液D（Reagent F）            毫升
G&VS10066.5G     离心液E（Reagent G）            毫升
G&VS10066.5H     离心液F（Reagent H）            毫升
G&VS10066.5I     离心液G（Reagent I）            毫升
G&VS10066.5J     保存液（Reagent J）                毫升

试剂盒订购信息
产品编号        名称                    规格
G&VS10066.1    动物组织肌质网粗提分离试剂盒            10次
G&VS10066.2    动物组织活性肌质网分离试剂盒            10次
G&VS10066.3    动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒        10次
G&VS10066.4.1    动物组织肌质网横小管（T Tubules）粗提分离试剂盒    10次
G&VS10066.4.2    动物组织肌质网横小管（T Tubules）高纯分离试剂盒    10次
G&VS10066.5    动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒        10次