CAT#:JW-220156-20
常温运输和保存

酵母化学感受态细胞制备试剂盒

产品及特点
本酵母化学感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理，高效快速制备酿酒酵母化学感受态细胞，用于长期冻存以备后续转化的产品，它具有下列特点：
1.一次制备，-80℃保存，多次使用，免去每次转化都要制备酿酒酵母感受态细胞。
2.操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要30分钟。
3.主要用于酿酒酵母S. cerevisiae，也适用于其他多种实验用酵母菌株，包括S. pombe、C. albicans、Pichia pastoris等。
4.受体酵母可以不含质粒，也可用于携带有选择性质粒的酵母（如双杂交体系中的酵母）。
5.对酿酒酵母，最高转化效率可达到0.2-1×10E5个转化子/ug质粒DNA。对其他酵母，效率稍低，范围在100-2000个转化子/ug质粒DNA。
6.得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp, YRp, YCp, YEp和YAC等。
7.可以用于酵母双杂交、定点突变（Site－Directed Mutagenesis）、基因破坏（Gene Disruption）、等位突变基因修复（Mutant Allele Recovery）等实验。
8.本产品可以制备20只酵母感受态细胞（需要200 mL酵母培养液），并还带高效转化液。
9.本产品只可用于科研。

规格及成分
成份                                        编号        规格            包装
酵母化学感受态制备液A    220156a      120 mL    125 mL本色瓶
酵母化学感受态制备液B    220156b      6 mL        10 mL本色瓶
酵母化学感受态制备液C    220156c      10 mL    10 mL本色瓶
酵母化学感受态转化液A    220156a      30 mL    30 mL本色瓶
酵母化学感受态转化液B    220156b      30 mL    30 mL本色瓶
使用手册                            220156sc    1份          无
本产品使用大扁盒包装

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂
YPD培养基。

使用方法
一、酵母化学感受态细胞的制备
说明：按本方法制备1管酵母化学感受态细胞就需要OD600达到0.6-1.0的新鲜酵母培养液10 mL，用户需根据所需酵母感受态细胞的数量决定培养细胞的体积。如果超过10 mL，则制备液的使用量需要按比例增加。
1.挑取酵母受体菌的新鲜的单菌落（4℃放置不超过3周的也可以），接种到装在50 mL离心管中的10 mL的自备的YPD培养基中。
2.30℃摇晃培养，摇床速度250 rpm/分钟，直到OD600达到0.6-1.0（相当于0.6-1×107细胞/mL）。
3.室温3000rpm离心5 min，弃上清得酵母细胞沉淀。
4.新鲜制备适量的酵母感受态制备工作液。对10 mL酵母需要5.25 mL的工作液，其配制方法是：将4.75 mL酵母化学感受态制备液A、0.25 mL酵母化学感受态制备液B和0.25 mL酵母化学感受态制备液C加入到一个无菌的离心管中后充分震荡混匀即可。酵母感受态制备工作液可放室温待用。
5.用0.5倍体积的新鲜配制的酵母感受态制备工作液洗涤酵母细胞沉淀一次（对10 mL酵母则需要5 mL酵母感受态制备工作液）。即混合后振荡1分钟，室温3000rpm离心3分钟，去上清得洗涤后的酵母细胞沉淀。
6.再用0.02倍体积的酵母感受态制备工作液充分重悬菌体（对10 mL酵母，则需要0.2 mL酵母感受态制备工作液）。
7.按每管0.2 mL分装到冷冻管中，放入保温冰盒中冷却半小时后再放入-80℃冰箱待用。0.2 mL的感受态细胞足够1次转化使用。注意：放入保温冰盒的目的是使温度缓慢下降，急冻将使转化效率降低，这点跟大肠杆菌感受态制备过程不同。

二、化学转化酵母感受态细胞
8.将总体积不超过20 uL的0.1-5 ug质粒DNA加到刚从-80℃冰箱取出的、还处于凝固状态的0.2 mL酵母感受态细胞上。注意：最好同时做一个不加质粒DNA的阴性对照组。
9.室温充分振荡直到凝固的感受态细胞完全融化。注意：此步非常关键，如果能在恒温振荡器上37℃振荡5分钟，则效果更好。
10.加入1.4 mL酵母化学感受态转化液A，轻柔颠倒混匀一分钟。
11.30℃培养1小时。
12.室温3000g离心5分钟，弃上清。
13.在酵母细胞沉淀中加1.0 mL酵母化学感受态转化液B，振荡一分钟。
14.室温3000g离心5分钟，弃上清。
15.在酵母沉淀细胞中加入适量（如100 uL）的酵母化学感受态转化液B，混匀后在在选择培养基上全部涂盘。
16.30℃培养3-5天后即得酵母转化菌落。

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