动物组织肌质网粗提分离试剂盒产品说明书

主要用途
 动物组织肌质网粗提分离试剂是一种旨在从动物肌肉组织中分离出完整而纯化的肌质网细胞器 组分的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种动物肌肉 组织(人体、老鼠、兔子等的心脏、骨骼肌)的肌质网的制备。可以被用于肌肉收缩机制、信号传递、钙 离子通道、蛋白组学和细胞生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用， 性能稳定，分离 产量和纯度俱佳。

技术背景
肌质网(sarcoplasmic reticulum；SR) 细胞器组分是由两种特征性的膜结构系统组成： 来自于内质网的纵小 池(longitudinal cisternae)和包括三连体(triad)、肌纤维膜管性内褶形成的横小管(Ttubules)。肌质网 的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低 速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得肌质网；甚至，第四，可以通过等 密度离心获得纯度更高的肌质网。

产品内容
清理液(Reagent A)    毫升
酶解液(Reagent B)    毫升
裂解液(Reagent C)    毫升
净化液(Reagent D)    毫升
强化液(Reagent E)    毫升
稳定液(Reagent F)    毫升
保存液(Reagent G)    毫升
产品说明书    1 份

保存方式
保存 酶解液(Reagent B)和 净化液(Reagent D) 在－20℃冰箱里， 其余的保存在 4℃ 冰箱里，有效保证 6 月

用户自备
15 毫升锥形离心管：用于肌质网初步制备物的存放
50 毫升锥形离心管：用于组织收集后离心或清洗
1.5 毫升离心管：用于保存肌质网
4℃台式离心机：用于沉淀组织
4℃超速离心机：用于分离细胞器成分
DOUNCE 匀浆器：用于裂解组织

实验步骤
一、  组织匀浆法
实验开始前，将试剂盒里的 净化液(Reagent  D) 冻融，然后移出 xx 毫升 净化液     (Reagent D) 到 xx 毫升的 裂解液(Reagent C) 里， 混匀后， 置入冰槽里， 标记为 裂解工作液。然后进行下列操作。
1 ．  手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定组织重量(实验前最好使动物空腹 12 至 24 小 时)
2 ．   (选择步骤)放进预冷的 50 毫升锥形离心管
3 ．   (选择步骤)加入适量的(1 克组织需要 xx 毫升) 清理液(Reagent A) 清洗 1 次
4 ．  即刻用刀片切碎组织
5 ．  放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管
6 ．  加入预冷的 xx 毫升 酶解液(Reagent B)，充分混匀
7 ．  放进冰槽里孵育 3 分钟
8 ．  放进 4℃台式离心机离心 2 分钟，速度为 1000g
9 ．  小心抽去上清液
10．加入预冷的 xx 毫升 清理液(Reagent A) 和 2 毫升 净化液(Reagent D)，充分 混匀
11．放进 4℃台式离心机离心 2 分钟，速度为 1000g
12．小心抽去上清液
13．加入预冷的 xx 毫升 裂解工作液
14．涡旋震荡 5 秒，充分混匀
15．即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器
16．在冰槽里用研磨棒匀化组织(约 80 下)(注意： 参见注意事项5)
17．将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
18．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
19．小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
20．加入预冷的 xx 微升 稳定液(Reagent F)，混匀
21．放进 4℃超速离心机离心 20 分钟，速度为 15000g
22．小心移出上清液到另一个新的预冷的 6 毫升超速离心管——此步骤去除线粒体和肌纤维沉淀物
23．放进 4℃超速离心机再次离心 60 分钟，速度为 120000g
24．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得肌质网组分
25．加入 xx 毫升 保存液(Reagent G)，充分混匀沉淀物
26．(选择步骤)放进 4℃台式离心机离心 15 分钟，速度为 1500g
27．即刻移入上清液到 1.5 毫升离心管，放入－70℃冰箱里

二、  化学处理法
实验开始前，将试剂盒里的 净化液(Reagent  D) 冻融，然后移出 xx 毫升 净化液     (Reagent D) 到 xx 毫升的 裂解液(Reagent C) 里， 混匀后， 置入冰槽里， 标记为 裂解工作液。然后进行下列操作。
1 ．  手术取出动物组织，避免或去除脂肪组织，秤重以确定组织重量(实验前最好使动物空腹 12 至 24 小 时)
2 ．   (选择步骤)放进预冷的 50 毫升锥形离心管
3 ．   (选择步骤)加入适量的(1 克组织需要 xx 毫升) 清理液(Reagent A) 清洗 1 次
4 ．  移入一个液氮冻存管
5 ．  即刻放入液氮罐过夜
6 ．  次日从液氮罐里取出，即刻(最快速度)碾碎组织(注意： 切莫使组织冻融)
7 ．  放进一个 15 毫升锥形离心管
8 ．  加入预冷的 xx 毫升 酶解液(Reagent B)，充分混匀
9 ．  放进冰槽里孵育 3 分钟
10．放进 4℃台式离心机离心 2 分钟，速度为 1000g
11．小心抽去上清液
12．加入预冷的 xx 毫升 清理液(Reagent A) 和 xx 毫升 净化液(Reagent D)，充 分混匀
13．放进 4℃台式离心机离心 2 分钟，速度为 1000g
14．小心抽去上清液
15．加入预冷的 xx 毫升 裂解工作液
16．涡旋震荡 5 秒，充分混匀
17．在冰槽里孵育 2 分钟，期间涡旋震荡 5 秒一次
18．加入预冷的 xx 微升 强化液(Reagent E)
19．涡旋震荡 5 秒，充分混匀
20．在冰槽里孵育 5 分钟，期间涡旋震荡 5 秒二次(注意： 参见注意事项6)
21．加入预冷的 xx 毫升 裂解液(Reagent C)，轻轻摇动试管混匀
28．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
29．小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
30．加入预冷的 xx 毫升 稳定液(Reagent F)，混匀
31．放进 4℃超速离心机离心 20 分钟，速度为 15000g
32．小心移出上清液到 2 个新的预冷的6 毫升超速离心管——此步骤去除线粒体和肌纤维沉淀物
33．放进 4℃超速离心机再次离心 60 分钟，速度为 120000g
34．小心抽去上清液，保留沉淀颗粒――此步骤获得肌质网组分
35．分别加入 xx 微升 保存液(Reagent G)，充分混匀沉淀物
36．(选择步骤)放进 4℃台式离心机离心 15 分钟，速度为 1500g
37．即刻合并移入上清液到 1.5 毫升离心管，放入－70C冰箱里

注意事项
1 ．  本产品为 10 次(1 克动物组织)操作
2 ．  所有操作均须在 4℃或以下状态进行
3 ．  建议使用足够的样品量
4 ．  建议严格控制操作时间
5 ．  通常匀化次数为 80 下达到 80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织类型会存在差异。用户可以通 过显微镜观察 3 微升匀浆物的细胞裂解程度： 完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加匀化次数
6 ．  通常孵育 5 分钟达到 80％的细胞裂解为理想状态， 但不同的组织类型会存在差异。用户可以通过显微 镜观察 3 微升匀浆物的细胞裂解程度： 完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加孵育时间和涡旋震荡次数
7 ．  对于难以裂解的组织，采用物理匀浆法是优先推荐的技术处理
8 ．  通常 1 克动物组织的肌质网含量为 500 至 1000 微克蛋白
9 ．  本产品所获得的肌质网纯度和产量最为理想
10．如果需要获得95％以上纯度的肌质网，使用XX动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒－
G&VS10066.3
11．本公司提供系列亚细胞结构分析试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定分离的肌质网维持正常活性
3 ．  本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息    
编号        名称            规格
G&VS10066. 1    动物组织肌质网粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10066. 1A    清理液(Reagent A)        500 毫升
G&VS10066. 1B    酶解液(Reagent B)        100 毫升
G&VS10066. 1C    裂解液(Reagent C)        500 毫升
G&VS10066. 1D    净化液(Reagent D)        100 毫升
G&VS10066. 1E    强化液(Reagent E)        50 毫升
G&VS10066. 1F    稳定液(Reagent F)        50 毫升
G&VS10066. 1G    保存液(Reagent G)        50 毫升
产品编号        名称            规格
G&VS10005    亚细胞结构分离试剂盒    10 次
G&VS10040. 1. 1    动物细胞内质网粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10040. 1.2    动物组织内质网粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10040.2. 1    动物细胞活性内质网分离试剂盒    10 次
G&VS10040.2.2    动物组织活性内质网分离试剂盒    10 次
G&VS10040.3. 1    动物细胞高纯内质网分离试剂盒    10 次
G&VS10040.3.2    动物组织高纯内质网分离试剂盒    10 次
G&VS10041. 1    通用型内质网形态染色试剂盒    100 次
G&VS10041.2    内质网形态高质染色试剂盒    20 次
G&VS10066. 1    动物组织肌质网粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10066.2    动物组织活性肌质网分离试剂盒    10 次
G&VS10066.3    动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒    10 次
G&VS10066.4    动物组织肌质网横小管(T Tube)分离试剂盒    10 次
G&VS10066.5    动物组织肌质网三联体(TRIAD)分离试剂盒    10 次
G&VS10100    动物细胞核分离试剂盒    50 次
G&VS10117    细胞微管分离试剂盒    10 次
G&VS10118    细胞溶酶体分离试剂盒    10 次
G&VS10119    细胞过氧化酶体分离试剂盒    10 次
G&VS10121    细胞溶酶体形态染色试剂盒    20 次
G&VS10143. 1    动物细胞染色体分离试剂盒    20 次
G&VS10143.2    植物细胞染色体分离试剂盒    20 次
G&VS10143.3    酵母细胞染色体分离试剂盒    20 次