海洋动物虾贝类组织线粒体粗提分离试剂盒产品说明书

主要用途
 海洋动物虾贝类组织线粒体粗提分离试剂是一种旨在从海洋动物虾贝类软体组织中分离出完整 而纯化的线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适 合于各种海洋动物软体组织的线粒体的制备。其制备物产量高，可以被用于细胞凋亡、信号传递、能量代 谢、蛋白组学和病理生理学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定， 分离产量和 纯度堪称同类产品最佳。

技术背景
线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方 法基本上采用：第一，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞 器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。线 粒体的核酸遗传物质，具有进化速度快、非重组变异和母系遗传等特点，已成为最广泛使用的分子系统学 标记之一，  已广泛应用于海洋动物学，尤其是虾贝类的分类学、群体遗传学和近缘种间系统发育研究。

产品内容
清理液(Reagent A)    毫升
裂解液(Reagent B)    毫升
净化液(Reagent C)    毫升
酶解液(Reagent D)    毫升
保存液(Reagent E)    毫升
产品说明书    1 份

保存方式
保存 净化液(Reagent C)和 酶解液(Reagent D) 在－20℃冰箱里， 其余的保存在 4℃ 冰箱里，有效保证 12 月

用户自备
15 毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放
50 毫升锥形离心管：用于组织收集后离心或清洗
1.5 毫升离心管：用于保存线粒体
4℃台式离心机：用于沉淀组织细胞
4℃超速离心机：用于分离细胞器成分
DOUNCE 匀浆器：用于裂解组织

实验步骤
一、软体组织线粒体分离
实验开始前， 将－20℃冰箱里的 净化液(Reagent C) 取出冻融， 然后移出      毫升 净化
液(Reagent C) 和XX毫升的 裂解液(Reagent B) 到 15 毫升锥形离心管里，混匀后，标记为
裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。
1.  取出待测动物组织，并秤重 1 克组织重量
2.   (选择步骤)放进预冷的 50 毫升锥形离心管
3.   (选择步骤)加入XX毫升 清理液(Reagent A) 清洗
4.   (选择步骤)小心抽去清洗液
5.  移入到一个液氮冻存管
6.  即刻放进液氮罐过夜
7.  次日从液氮罐里取出，即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意： 切莫使组织冻融)
8.  放进一个 15 毫升锥形离心管
9.  加入XX毫升预冷的 裂解工作液
10. 涡旋震荡 5 秒，充分混匀
11. 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器
12. 在冰槽里用研磨棒匀化组织(约 80 下) (注意： 参见注意事项 7)
13. 将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
14. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
15. 小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
16. 放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g
17. 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物
18.  (注意： 如果进行线粒体DNA萃取，直接进入线粒体DNA萃取试剂盒的步骤4，继续下去)
19.  (选择步骤)加入 3 毫升预冷的 保存液(Reagent E)
20.  (选择步骤)放进 4℃超速离心机再次离心 5 分钟，速度为 10000g
21.  (选择步骤)小心抽去上清液
22. 加入XX微升 保存液(Reagent E)，充分混匀
23. 即刻移入 1.5 毫升离心管，放进－70℃冰箱里

二、软体肌肉组织线粒体分离
实验开始前， 将－20℃冰箱里的 净化液(Reagent C) 取出冻融， 然后移出XX毫升 净化
液(Reagent C) 和XX毫升的 裂解液(Reagent B) 到 15 毫升锥形离心管里，混匀后，标记为
裂解工作液，放进冰槽里备用。然后进行下列操作。
1.  取出待测动物组织，并秤重 1 克组织重量
2.   (选择步骤)放进预冷的 50 毫升锥形离心管
3.   (选择步骤)加入XX毫升 清理液(Reagent A) 清洗
4.   (选择步骤)小心抽去清洗液
5.  移入到一个液氮冻存管
6.  即刻放进液氮罐过夜
7.  次日从液氮罐里取出，即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意： 切莫使组织冻融)
8.  放进一个 15 毫升锥形离心管
9.  加入预冷的XX毫升 酶解液(Reagent D)，充分混匀
10. 放进冰槽里孵育 3 分钟
11. 放进 4℃台式离心机离心 2 分钟，速度为 1000g
12. 小心抽去上清液
13. 加入预冷的XX毫升 清理液(Reagent A) 和XX毫升 净化液(Reagent C)，充 分混匀
14. 放进 4℃台式离心机离心 2 分钟，速度为 1000g
15. 小心抽去上清液
16. 加入XX毫升预冷的 裂解工作液
17. 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器
18. 在冰槽里用研磨棒匀化组织(约 80 下) (注意： 参见注意事项 7)
19. 将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
20. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1500g
21. 小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
22. 放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 10000g
23. 小心抽去上清液，保留沉淀颗粒——此步骤获得线粒体沉淀物
24.  (注意： 如果进行线粒体DNA萃取，直接进入线粒体DNA萃取试剂盒的步骤4，继续下去)
25.  (选择步骤)加入XX毫升预冷的 保存液(Reagent E)
26.  (选择步骤)放进 4℃超速离心机再次离心 5 分钟，速度为 10000g
27.  (选择步骤)小心抽去上清液
28. 加入XX微升 保存液(Reagent E)，充分混匀
29. 即刻移入 1.5 毫升离心管，放进－70℃冰箱里

注意事项
1．  本产品为 10 次(1 克动物组织)操作
2．  所有操作均须严格在 4℃或以下状态进行
3．  操作时，须戴手套
4．  操作时，须无菌操作，避免污染母液，尤其是 裂解液(Reagent  B) 和 保存液 (Reagent E)
5．  建议使用足够的样品量
6．  建议严格控制操作时间
7．  通常匀化次数为 80 下达到 80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户 可以通过显微镜观察 3 微升匀浆物的细胞裂解程度： 完整细胞呈现发亮的圆环。低于 50％可以增加匀 化次数
8．  通常 1 克动物组织的线粒体含量为 50 微克线粒体蛋白； 但海洋动物的线粒体含量较低， 平均每个细胞 含有 2000 个线粒体不等
9．  如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解
10．本产品所获得的线粒体纯度和产量最为理想。通过调整10000g离心速度到3000至8000g， 可以提高粗提 的线粒体纯化程度，但线粒体产量相应减少
11．如果需要获得99％以上纯度的线粒体， 使用XX海洋动物(虾贝类) 高质纯化线粒体分离试剂盒 －G&VS10063.3
12 ．线粒体正常活性测定方法是：  CITRATE SYNTHASE 活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等
13 ．线粒体内外膜完整测定方法是： CYTOCHROME C OXIDASE 活性和荧光 JC 染色
14 ．本公司提供线粒体套餐： ROS 、NAO 、MitoTRACK、JGB、线粒体溶解等
15．本公司提供用户完全解决方案服务
16．本公司提供系列线粒体分析试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整
3 ．  本产品经鉴定分离的线粒体维持正常活性
4 ．  本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称                规格
G&VS10063.1    海洋动物虾贝类组织线粒体粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10063.1A    清理液(Reagent A)            500 毫升
G&VS10063.1B    裂解液(Reagent B)            100 毫升
G&VS10063.1C    净化液(Reagent C)            100 毫升
G&VS10063.1D    酶解液(Reagent D)            100 毫升
G&VS10063.1E    保存液(Reagent E)            100 毫升

产品编号        名称                规格
G&VS10006. 1    动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒    10/50 次
G&VS10006.2    动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒    10/50 次
G&VS10006.3    动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10006.4. 1    动物硬组织线粒体粗提分离试剂盒    50 次
G&VS10006.4.2    动物硬组织活性线粒体分离试剂盒    50 次
G&VS10006.4.3    动物硬组织高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10013. 1    纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    100 次
G&VS10013.2    活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    20 次
G&VS10013.3    活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    20 次
G&VS10013.4    完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    20 次
G&VS10014. 1    线粒体外膜功能检测试剂盒    20 次
G&VS10014.2    纯化线粒体细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒    20 次
G&VS10014.3    细胞/组织悬液细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒    20 次
G&VS10014.4    纯化细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒    20 次
G&VS10014.5    真菌/酵母细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒    20 次
G&VS10014.6    植物细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒    20 次
G&VS10015    线粒体功能詹纳斯绿 B  (JGB)染色试剂盒    20 次
G&VS10016. 1    细胞内氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒    20 次
G&VS10016.2    细胞内氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒    100 次
G&VS10016.3    活体组织氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒    8/20 次
G&VS10016.4    活体组织氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒    40/100 次
G&VS10016.5    冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒    50 次
G&VS10016.6    冰冻切片氧化应激活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒    50 次
G&VS10067    细胞内氧化应激活性氧(ROS)比色法定量检测试剂盒    100 次
G&VS10074. 1    细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光定性检测试剂盒    20 次
G&VS10074.2    细胞内氧化应激活性氧(ROS)红色荧光定量检测试剂盒    20 次
G&VS10017. 1    活体细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒    20/200 次
G&VS10017.2    纯化线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒    20/200 次
G&VS10018    纯化线粒体溶解试剂盒    20 次
G&VS10019. 1    活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100 次
G&VS10019.2    植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100 次
G&VS10019.3    真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100 次
G&VS10020. 1    活体细胞线粒体跟踪试剂盒    100 次
G&VS10020.2    活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒    20 次
G&VS20023.2    全血线粒体 DNA 萃取试剂盒    10/20 次
G&VS20023. 1    纯化线粒体 DNA 萃取试剂盒    20 次
G&VS20023.3    细胞/组织线粒体 DNA 萃取试剂盒    20 次
G&VS20023.4    细胞/组织基因组/线粒体 DNA 同步萃取试剂盒    10/20 次
G&VS20023.5    动物血小板线粒体 DNA 萃取试剂盒    10/20 次
G&VS20023.6    真菌/酵母细胞线粒体 DNA 萃取试剂盒    10/20 次
G&VS20023.7    植物线粒体 DNA 萃取试剂盒    10/20 次
G&VS10047    非突触体脑组织线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10048. 1    植物线粒体粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10048.2    植物活性线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10048.3    植物高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10049. 1    真菌/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10049.2    真菌/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10049.3    真菌/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10050    细胞 ATP 定量检测试剂盒    20 次
G&VS10059    纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒    20 次
G&VS10062. 1    动物血小板线粒体粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10062.2    动物血小板活性线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10062.3    动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS50001    超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒    50 次
G&VS50003.2    线粒体超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分离试剂盒    50 次
G&VS50004    超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒    5 次
G&VS30034. 1    纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒    20 次
G&VS30034.2    细胞/组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒    20 次
G&VS30034.3    真菌/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒    20 次
G&VS30034.4    植物线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒    20 次
G&VS30034.5    全血线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒    20 次
G&VS30034.6    动物血小板线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒    20 次
G&VS50005    NADH 活性定量检测试剂盒    20/80 次
G&VS50006    乳酸脱氢酶(LDH)总活性定量检测试剂盒    20/80 次
G&VS50007    动物线粒体呼吸链复合物 I  (NADH－辅酶 Q 还原酶) 活性定量检测 试剂盒    20 次(10 样本)
G&VS50008    动物线粒体呼吸链复合物 II  (琥珀酸－辅酶 Q 还原酶) 活性定量检 测试剂盒    20 次
G&VS50009    动物线粒体呼吸链复合物 III  (辅酶 Q－细胞色素 C 还原酶)活性定 量检测试剂盒    20 次(10 样本)
G&VS50010    动物线粒体呼吸链复合物 IV  (正铁细胞色素 C－氧化还原酶)活性 定量检测试剂盒    20 次
G&VS50083    动物线粒体呼吸链复合物 IV(F0F1-ATP 酶/ATP 合成酶) 活性定量检 测试剂盒    20 次(10 样本)
G&VS10063. 1    海洋动物(虾贝类)线粒体粗提分离试剂盒    10/50 次
G&VS10063.2    海洋动物(虾贝类)活性线粒体分离试剂盒    10/50 次
G&VS10063.3    海洋动物(虾贝类)高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10065    线粒体膜通道孔(MPTP)检测试剂盒    20 次
G&VS12198    纯化线粒体冻存液    50 毫升
G&VS50067    NADPH 活性定量检测试剂盒    20/80 次
G&VS50068. 1    纯化线粒体L－3 羟酰基－CoA 脱氢酶II 型／β淀粉样蛋白结合的乙 醇脱氢酶(HADHII/ABAD) 活性定量检测试剂盒    20 次
G&VS50068.2    细胞L－3 羟酰基－CoA 脱氢酶II 型／β淀粉样蛋白结合的乙醇脱氢 酶(HADHII/ABAD)活性定量检测试剂盒    20 次
G&VS50068.3    组织L－3 羟酰基－CoA 脱氢酶II 型／β淀粉样蛋白结合的乙醇脱氢 酶(HADHII/ABAD)活性定量检测试剂盒    20 次
G&VS50084. 1    纯化线粒体 NADH 氧化酶活性定量检测试剂盒    20 次
G&VS50084.2    细胞线粒体 NADH 氧化酶活性定量检测试剂盒    20 次
G&VS50084.3    组织线粒体 NADH 氧化酶活性定量检测试剂盒    20 次
G&VS10090    NADP 活性定量检测试剂盒    20 次