CAT#:JW-220142
常温运输及保存，有低温成分  

分枝杆菌DNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
分枝杆菌属（Mycobacterium）是一类极为古老的革兰氏阳性细菌属，它具有不同于别的细菌的细胞壁结构，其靠近细胞膜的部分是其他革兰氏阳性细菌都具有的肽聚糖层，该层通过磷酸二酯键与分枝酸-阿拉伯半乳糖-肽聚糖复合层共价连接。分枝酸是含70～90个碳原子的枝链脂肪酸，位于MAPc的外层，分枝杆菌因此而得名。MAPc层之外为糖化脂质层（glycolipid），它与分枝酸相连，成分主要是磷脂，占细胞壁干重的比例高达60%，所以分枝杆菌疏水性很强，不能使用革兰氏染色。分枝杆菌细胞壁还含有贯穿整个细胞壁的脂阿拉伯糖甘露聚糖，它是一种含阿拉伯糖和甘露糖的磷酸化的、不均一混合物，其末段所连接的成分的不同与细菌对巨噬细胞反应的不同密切相关。分枝杆菌细胞壁的上述特点使得用常规方法纯化其DNA非常困难。本产品就是为解决这一问题而开发的产品，它具有下列特点：
1.操作简单，客户不需要准备额外的试剂。
2.适用于整个分枝杆菌属。
3.获得的基因组DNA足够进行后续的核酸扩增或酶切处理。PCR检测灵敏度一般在10-100 CFU/mL样品。
4.既可以使用培养的分枝杆菌，也可以使用从痰液、精液、血液、脑脊液等样品中分离的分枝杆菌。
5.安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。
6.本产品足够50次分枝杆菌DNA的纯化实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大纸盒包装
成份            编号    规格    包装
分枝杆菌DNA纯化溶液A    220142a    7.5 mL    10 mL本色瓶
分枝杆菌DNA纯化溶液B    220142b    15 mL    15 mL棕玻瓶
分枝杆菌DNA提取溶液C    220142c    30 mL    30 mL本色瓶
化痰液成分（干粉）        220142d    5 g    10 mL本色瓶
离心吸附柱        220144    50套    塑料袋
通用洗柱液        220143    50 mL    60 mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组纯化专用）    220125    10 mL    10 mL本色瓶
使用手册            220142sc    1份    1份

运输及保存
常温运输，但化痰液成分（干粉）和分枝杆菌DNA纯化溶液B需要4℃保存，有效期一年。

自备试剂
TE缓冲液，氯仿。

使用方法
注意：文献报道部分分枝杆菌在DNA提取过程中还有形成菌落的能力，所以任何丢弃的溶液都必须按有传染性的污染物品对待，并严格按有关要求进行消毒处理。
一: 培养的分枝杆菌样品的预处理
1.刮取培养皿培养的分枝杆菌到0.5 mL 自备TE缓冲液中。
2.80℃放置20分钟以杀灭分枝杆菌。
3.3,000× g室温离心15分钟，弃上清。
4.将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。
二: 含分枝杆菌的痰液样品的预处理
1.将痰液样品(0.5 mL-2 mL)加入到干净的10 mL或15 mL塑料离心管中。
2.加2 mL的自备蒸馏水，再加入100 mg化痰液干粉，充分混合均匀后室温放置15-30分钟。如果痰很浓，可以延长保温时间30分钟。
3.3,000×g室温离心15分钟，弃上清。
4.将分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。
三: 含分枝杆菌的血液样品的预处理
1.用自备红细胞裂解液对血液进行红细胞裂解处理（可另购本公司红细胞裂解液产品）。
2.将得到的白细胞沉淀放-20℃或更低温度放置10分钟。
3.迅速将得到的白细胞沉淀100℃加热10分钟。
4.上述处理将使大部分白细胞破裂，加入自备的TE到离心管体积的一半位置。此步使白细胞的DNA进入缓冲液中。
5.离心5-10分钟沉淀分枝杆菌，离心速度取决于离心管的大小。如果样品在1.5 mL离心管，则可以12,000-15,000×g室温离心。如果样品在10-15 mL离心管，则3,000-5,000×g室温离心。
6.吸弃上清(含白细胞DNA)，将所得分枝杆菌沉淀放-20℃冰箱备用或直接进入到第四步的分枝杆菌基因组DNA提取步骤。
四: 分枝杆菌基因组DNA的提取
1.将150 μL 65℃预热过的分枝杆菌DNA纯化溶液A加到有分枝杆菌沉淀的螺旋盖离心管中，充分震荡混匀。
2.将混合物转移到一个干净的1.5 mL塑料螺旋盖离心管中。强烈建议不要使用压盖式塑料离心管，否则后面处理过程溶液容易漏出。
3.加入300 μL分枝杆菌DNA纯化溶液B和300 μL 自备氯仿，充分震荡混匀。
4.-20℃放置直到液体凝固，一般需要30分钟。过夜放置也可。也可以-80℃放置10分钟直到液体凝固。
5.放室温融化后振荡半分钟。
6.12,000-15,000× g室温离心3-5分钟，小心转移全部上清到一个新离心管中。
7.加入等体积的分枝杆菌DNA纯化溶液C，颠倒混匀。
8.将液体转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟。
9.12,000-15,000×g室温离心半分钟，弃穿透液。
10.加入0.5 mL通用洗柱液 12,000-15,000×g室温离心半分钟，弃穿透液。
11.重复上步的洗涤过程一次。
12.短暂离心半分钟。此步不要省略，否则残留的洗柱液（含乙醇）将会影响DNA电泳、酶切和PCR等反应。
13.将离心吸附柱转移到一新的离心管中，加入50 μL DNA洗脱液（基因组纯化专用），12,000-15,000×g室温离心半分钟，所得溶液即分枝杆菌基因组DNA。
14.直接取5-10 μL电泳检测DNA，其余放冰箱备用或用于后续反应。
背景资料

分枝杆菌细胞壁结构图

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