CAT#:JW-220124
常温运输及保存

真菌DNA提取试剂盒(过柱法)

产品及特点
本产品是真菌基因组DNA柱式提取试剂盒，可以用于真菌基因组DNA的快速提取。真菌DNA提取是一个难题，一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种完全不同的结构形态，二是因为其细胞壁一般都很厚，比较难以破碎。本产品专门用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA。它具有如下特点：
1.即开即用，提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2.既可以采取液氮研磨法破裂真菌，也可用玻璃珠法破碎真菌，两种方法均属于物理方法，远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好，也不容易带入外援真菌DNA（注：文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染，用于提取真菌DNA往往会造成污染）。
3.本方法提取一个样品只需要30分钟，方便、快速和高效。
4.一次可以处理5 mL的过夜真菌培养物，所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右，长度一般在20 kb左右，每毫升菌液的DNA产率一般在1-3μg。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。
5.不会发生离心柱堵塞现象。
6.本产品足够50次微量纯化。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品采用大扁盒包装
成分            编号    规格    包装
真菌DNA提取溶液A        220124a    25 mL    30 mL本色瓶
真菌DNA提取溶液B        220124b    25 mL    30 mL棕玻瓶
真菌DNA提取溶液C        220124c    75 mL    125 mL本色瓶
离心吸附柱        211207    50套    塑料袋
通用洗柱液        220143    50 mL    60 mL本色瓶
DNA洗脱液（基因组提取专用）    220125    10 mL    10 mL本色瓶
酸洗玻璃珠(直径400μm-600μm)    220126    25 g    30 mL本色瓶
使用手册            220124sc    1份    无

运输及保存
常温运输及保存，保存期为一年。

自备试剂
无菌水。

使用方法
1.收集菌体或孢子:
1.1、对菌液：取3-5 mL过夜培养的真菌菌液(OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中，12000 rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。
1.2、对菌落：用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落（约50 mg），转移到装有1 mL自备无菌水的干净的塑料离心管中，洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。
1.3、对孢子材料，一般取0.1 g左右，直接加入到塑料离心管中，然后进入下一步操作。
2.在上述真菌材料中加入自备的无菌水1 mL，振荡半分钟后12000 rpm离心2分钟弃上清留菌体沉淀。此步用于洗涤菌体。
3.裂解真菌：
3.1、液氮研磨：在研钵中液氮研磨上述真菌材料成粉，然后转移到干净的离心管中，在离心管中加入500 μL真菌DNA提取溶液A，常温涡旋震荡3分钟。
3.2、玻璃珠破碎法：在没有液氮的条件下，采用此法。在菌体沉淀中加入500 μL真菌DNA提取溶液A和0.5克的酸洗玻璃珠，常温涡旋震荡10分钟。
4.在离心管中加入500 μL真菌DNA提取溶液B，涡旋震荡3分钟，12000 rpm离心2分钟，将透明的上清液全部转移到一个5 mL的干净的塑料离心管中。不要取蓝色的液体。
5.在上清中加入3倍体积的真菌DNA提取溶液C，颠倒数次混匀后，分三次上离心吸附柱，每次上柱后均先室温放置2分钟，然后12000 rpm离心1分钟，倒掉穿透液，再第二次上柱，重复上面的操作，直到挂柱步骤完成。
6.在离心吸附柱中加入500 μL通用洗柱液，12000 rpm离心1分钟，倒掉穿透液。此步可以洗涤掉杂质。
7.重复上步操作一次。
8.12000 rpm空柱离心1分钟。
9.加入50-100 μL DNA洗脱液（基因组提取专用），室温放置1分钟以上，12000 rpm离心1分钟，穿透液即为真菌DNA样品。
10.为了得到更多的DNA样品，可以重复上步操作1-2次。
11.所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。

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