非突触体脑组织线粒体分离试剂盒产品说明书

主要用途
 非突触体脑组织线粒体分离试剂是一种旨在从脑组织中分离出活性完整而高度纯化的非突触体 线粒体细胞器的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适合于各种 脑组织(人体和动物) 的活性线粒体的制备。其制备物产量高， 活性保存， 纯度可达 99％。可以被用于线 粒体酶活性、细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白水解酶和核酶，即到 即用，性能稳定。

技术背景
线粒体细胞器的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。从任何组织或细胞分离线粒体的技术方 法基本上采用：第一，通过机械或化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞 器；第三，通过高速差速离心获得线粒体；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的线粒体。动 物脑组织中，包括前脑部位的脑皮层(cortex)或脑纹体(striatum)往往存在着非突触体(non－     synaptosome) 和包含有髓轴突纤维(髓鞘； Myelin) 和神经末梢(突触体synaptosome)，结构的异源性导 致细胞线粒体的生物学特征的差异，纯化游离的脑组织线粒体(非突触体脑组织线粒体)是必需的。

产品内容
清理液(Reagent A)    毫升
裂解液(Reagent B)    毫升
净化液(Reagent C)    毫升
强化液(Reagent D)    毫升
保存液(Reagent E)    毫升
高纯液 A(Reagent F)    毫升
高纯液 B(Reagent G)    毫升
产品说明书    1 份

保存方式
保存 净化液(Reagent C)在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰箱里，高纯 液 A(Reagent F)和 高纯液 B(Reagent G)，避免光照，有效保证 12 个月。

用户自备
15 毫升锥形离心管：用于线粒体初步制备物的存放
50 毫升锥形离心管：用于细胞或组织收集后离心或清洗
1.5 毫升离心管：用于保存线粒体
3 毫升针筒和 18 号针头：用于抽取线粒体样品带 4℃台式离心机：用于沉淀细胞
4℃微型台式离心机：用于沉淀线粒体
4℃超速离心机：用于分离细胞器成分和高质纯化
DOUNCE 匀浆器：用于裂解细胞

实验步骤
一、组织匀浆法
实验开始前， 将试剂盒里的 净化液(Reagent C)冻融，然后移出   微升 净化液(Reagent C) 到   毫升的 裂解液(Reagent B)里， 混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行 下列操作。
1．  手术取出动物脑组织(脑皮层)，并秤重以确定脑组织重量(实验前最好使动物空腹 12 至 24 小时)
2．   (选择步骤)放进预冷的 50 毫升锥形离心管
3．   (选择步骤)加入适量的(500 毫克组织需要   毫升) 清理液(Reagent A)清洗 2 次
4．  即刻用刀片切碎组织
5．  放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管
6．  加入预冷的   毫升 裂解工作液
7．  涡旋震荡 5 秒，充分混匀
8．  即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器，在冰槽里用研磨棒匀化组织(约 20 下)
9．  将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管
10．放入 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g
11．小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的组织细胞
12．放进－70℃冰箱里备用或放进冰槽继续后续操作
13．移取   毫升 离心液 A(Reagent F)到 6 毫升超速离心管 (注意：使用前摇匀 高纯液 A(ReagentF))
14．轻轻加入   毫升的 离心液 B(Reagent G)在 离心液 A(Reagent F)上面，不要搅动 离心液 A(Reagent F) (注意： 使用前摇匀高纯液B(ReagentG))
15．轻轻加入   毫升组织上清液在 高纯液 B(Reagent G)的上面，避免震动
16．放进 4℃超速离心机离心 45 分钟，速度为 32000g
17．小心取出超速离心管：可见下层致密的棕色或乳黄色样品带(离心液 A(Reagent F)和 离心液 B(Reagent G)的交界处)；可见中层为髓鞘和突触体样品带以及上层少量细胞膜和细胞核样品 带)
18．小心抽去线粒体样品带以上的液体
19．小心收集线粒体样品带到 2 毫升离心管(用 3 毫升针筒和 18 号针头， 置于样品带下缘小心缓慢抽吸)
——此步骤获得高纯非突触体线粒体样品带
20．加入   至   毫升 保存液(Reagent E)
21．放进 4℃超速离心机离心 10 分钟，速度为 16000g(13000RPM，例如 eppendorf 5415D)
22．小心抽去上清液
23．(选择步骤)重复实验步骤 20 至 22 一次
24．加入   微升 保存液(Reagent E)，混匀
25．即刻移入到预冷的 1.5 毫升离心管
26．放进－70℃冰箱里保存

二、化学处理法
实验开始前， 将试剂盒里的 净化液(Reagent C)冻融，然后移出   微升 净化液(Reagent C) 到   毫升的 裂解液(Reagent B)里， 混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行 下列操作。
1．  手术取出动物脑组织(脑皮层)，并秤重以确定脑组织重量(实验前最好使动物空腹 12 至 24 小时)
2．   (选择步骤)放进预冷的 50 毫升锥形离心管
3．   (选择步骤)加入适量的(500 毫克组织需要   毫升) 清理液(Reagent A)清洗 2 次
4．  移入一个液氮冻存管
5．  即刻放入液氮罐过夜
6．  次日从液氮罐里取出，即刻(最快速度)碾碎组织(注意：切莫使组织冻融)
7．  放进一个 15 毫升锥形离心管
8．  加入预冷的   毫升 裂解工作液
9．  涡旋震荡 5 秒，充分混匀
10．在冰槽里孵育 2 分钟，期间涡旋震荡 5 秒一次
11．加入预冷的   微升 强化液(Reagent D)
12．涡旋震荡 5 秒，充分混匀
13．在冰槽里孵育 5 分钟，期间涡旋震荡 5 秒二次
14．加入预冷的   毫升 保存液(Reagent E)，轻轻摇动试管混匀
15．放入 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 1000g
16．小心移出上清液到另一个新的预冷的 15 毫升锥形离心管——此步骤去除细胞核和未溶解的细胞
17．放进－70℃冰箱里备用或放进冰槽继续后续操作
18．移取   毫升 离心液 A(Reagent F)到 6 毫升超速离心管 (注意：使用前摇匀 高纯液 A(ReagentF))
19．轻轻加入   毫升的 离心液 B(Reagent G)在 离心液 A(Reagent F)上面，不要搅动 离心液 A(Reagent F) (注意： 使用前摇匀高纯液B(ReagentG))
20．轻轻加入   毫升组织上清液在 高纯液 B(Reagent G)的上面，避免震动
21．放进 4℃超速离心机离心 45 分钟，速度为 32000g
22．小心取出超速离心管：可见下层致密的棕色或乳黄色样品带(离心液 A(Reagent F)和 离心液 B(Reagent G)的交界处)；可见中层为髓鞘和突触体样品带以及上层少量细胞膜和细胞核样品 带)
23．小心抽去线粒体样品带以上的液体
24．小心收集线粒体样品带到 2 毫升离心管(用 3 毫升针筒和 18 号针头， 置于样品带下缘小心缓慢抽吸) ——此步骤获得高纯非突触体线粒体样品带
25．加入   至   毫升 保存液(Reagent E)
26．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g(13000RPM，例如 eppendorf 5415D)
27．小心抽去上清液
28．(选择步骤)重复实验步骤 25 至 27 一次
29．加入   微升 保存液(Reagent E)，混匀
30．即刻移入到预冷的 1.5 毫升离心管
31．放进－70℃冰箱里保存

注意事项
1．  本产品为 10 次操作(500 毫克左右动物脑组织)。
2．  所有操作均须在 4℃或以下状态下进行。
3．  所有操作建议在无菌状态下进行。
4．  建议使用足够的组织。
5．  建议严格控制操作时间。
6．  通常 500 毫克脑组织的线粒体含量为 25 微克线粒体蛋白。
7．  如果需要计量线粒体，稀释后数分钟内完成，否则线粒体将分解。
8．  本产品所获得的线粒体纯度(可达到99％)和产量最为理想。
9．  使用GENMED高纯液A(Reagent F)和GENMED高纯液A(Reagent G)前，须摇匀后加入；并注意避免污染母 液。
10．根据超速离心管的大小调整GENMED高纯液A(Reagent F)和GENMED高纯液A(Reagent G)的使用量或在样 品上面加上石蜡油填满
11 ．线粒体正常活性测定方法是：  CITRATE SYNTHASE 活性、氧化磷酸化、细胞色素吸收峰谱等。
12．线粒体内外膜完整测定方法是：CYTOCHROME C OXIDASE 活性和荧光 JC 染色。
13 ．本公司提供线粒体套餐： ROS 、NAO 、MitoTRACK、JGB 、线粒体溶解等。
14 ．本公司提供用户完全解决方案服务。

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能长期稳定
2 ．  本产品经鉴定分离的线粒体内外膜完整
3 ．  本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
4 ．  本产品经鉴定分离的非突触体脑组织线粒体纯度达 99％

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK，RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号         名称                规格
G&VS10047    非突触体脑组织线粒体分离试剂盒      10 次
G&VS10047A    清理液(Reagent A)            500 毫升
G&VS10047B    裂解液(Reagent B)            100 毫升
G&VS10047C    净化液(Reagent C)            50 毫升
G&VS10047D    强化液(Reagent D)            50 毫升
G&VS10047E    保存液(Reagent E)            100 毫升
G&VS10047F    高纯液 A(Reagent F)            100 毫升
G&VS10047G    高纯液 B(Reagent G)            100 毫升

产品编号        名称            规格
G&VS10006. 1    线粒体粗提分离试剂盒    10 次
G&VS10006.2    活性线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10006.3    高质纯化线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10006.4    硬组织线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10013. 1    纯化线粒体内膜功能(JC)测定试剂盒    10/100 次
G&VS10013.2    活体细胞线粒体内膜功能(JC)测定试剂盒    20 次
G&VS10013.3    线粒体内膜功能(JC)测定试剂盒    5/10/50 次
G&VS10014. 1    线粒体外膜功能检测试剂盒    20 次
G&VS10014.2    细胞色素 C 氧化酶活性测定试剂盒    20 次
G&VS10015    线粒体功能詹纳斯绿 B(JGB)染色试剂盒    20 次
G&VS10016. 1    细胞内活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒    20 次
G&VS10016.2    细胞内活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒    100 次
G&VS10017    线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒    20 次
G&VS10018    线粒体溶解试剂盒    20 次
G&VS10019    线粒体形态染色试剂盒    100 次
G&VS10020. 1    线粒体跟踪试剂盒    100 次
G&VS10020.2    活体线粒体长期跟踪试剂盒    20 次
G&VS20023    线粒体 DNA 萃取试剂盒    20 次
G&VS10047    非突触体脑组织线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10048    植物线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10049    真菌(酵母菌)线粒体分离试剂盒    10 次
G&VS10050    细胞 ATP 定量检测试剂盒    20 次
G&VS50001    超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒    50 次
G&VS10003.2    线粒体超氧化物歧化酶(Mn/Fe SOD)分离试剂盒    50 次
G&VS50004    超氧化物歧化酶(SOD)标准曲线测定试剂盒    5 次