CAT#:JW-211231-50
常温运输和保存

软骨RNA纯化试剂盒（过柱法）

产品及特点
本产品专门从各种软骨组织样品中快速纯化总RNA的试剂盒，它能有效克服传统TRIzol方法提取软骨组织RNA时，十分容易产生糖蛋白和酸性多糖污染这一缺点。本产品具有下列特点：
1.能有效去除糖蛋白、粘蛋白污染。
2.OD260/280一般均在1.9以上。
3.RNA产率一般为5-15 ug/100 mg。
4.操作简单，整个提取过程一般只需要10多分钟。
5.得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern杂交、mRNA纯化、Primer Extension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用大扁盒包装
成 份                                编 号    规格    包装
软骨RNA纯化溶液A    211231a    50 mL    60mL本色瓶
软骨RNA纯化溶液B    211231b    15 mL    15mL棕色玻璃瓶
软骨RNA纯化溶液C    211231c    50 mL    60mL本色瓶
离心吸附柱                    220144    50套    塑料袋
通用洗柱液                    220143    50 mL    60mL本色瓶
RNA洗脱液                    971207    10 mL    10mL本色瓶
使用手册                        211231sc    1份    无

运输及保存
常温运输和保存，有效期一年。软骨RNA纯化溶液B 4℃保存。

自备试剂
氯仿。

使用方法
1.先将50-200 mg新鲜或冷冻的软骨组织在研钵中液氮研磨成粉，加入到装有1 mL软骨RNA纯化溶液A的1.5mL离心管中（软骨RNA纯化溶液A低温放置会产生沉淀，如果有沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并摇晃混匀），振荡混合30秒。也可以将软骨组织剪碎后与软骨RNA纯化溶液A在10-15mL塑料管中用Polytron匀浆机(内切式匀浆机)匀浆5-20秒，再转移到1.5 mL离心管中。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。
2.在离心管中加入0.3 mL的软骨RNA纯化溶液B和0.2 mL自备氯仿，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
3.室温12000-15000 g离心3-5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
4.将上清液(约0.6 mL)转移到另一干净的1.5 mL塑料离心管中，下层紫色有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。最好留下100 uL上清液不取。
5.加入等体积的软骨RNA纯化溶液C，充分颠倒混匀。
6.将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
7.将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中， 12000-15000 g室温离心半分钟，弃穿透液。
8.加0.7 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。
9.加0.3 mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
11.将离心吸附柱转移到自备的RNase-free离心管中，加入50uL RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
12.12000-15000 g室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13.RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。
14.RNA产量产率测定：可以用Nanodrop测RNA的浓度。如果用常规分光光度计，则将5μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40 μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。注意：测定OD时不要稀释过度，否则浓度会在仪器能测的范围之外。本方法提取的RNA测OD时一般最多只能稀释10-20倍。
15.RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

关联产品
固相RNase清除剂