组织ATP生物发光法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
组织ATP生物发光法定量检测试剂是一种旨在通过萤火虫荧光素酶反应系统，荧光素在酶的催化下，与ATP发生反应，产生生物光能，采用冷光仪测定其相对冷光单位的变化，来定量分析组织样品中ATP浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体或动物组织的ATP检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，高度敏感。

技术背景
三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate；ATP）存在于所有代谢活跃的细胞内，是细胞活力的标志。一旦细胞凋亡或坏死，ATP浓度急遽下降。萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase）是62 kd 的单体蛋白，催化ATP依赖性荧光素（luciferin）的氧化，经过电子转移，将化学能转化为氧化型荧光素（oxyluciferin）的光能，与ATP量成线性正相关，通过冷光仪（560nm）检测，由此定量ATP浓度。其反应方式为：

产品内容
清理液（Reagent A）     毫升
裂解液（Reagent B）     毫升
缓冲液（Reagent C）     毫升
反应液（Reagent D）     微升
标准液（Reagent E）        微升
产品说明书        1份

保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里；其余的保存在－20℃冰箱里，严格避免光照和反复冻融；有效保证3月

用户自备
1.5毫升离心管：用于样品保存和标准液配制的容器
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
50毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
黑色96孔板：用于冷光检测操作的容器
（微型）台式离心机：用于样品沉淀
冷光仪：用于样品冷光检测

实验步骤
一、待测样品准备
1．手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量
2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．移入到一个液氮冻存管
5．即刻放进液氮罐过夜
6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7．放进一个15毫升锥形离心管
8．加入置于冰槽里的xx微升裂解液（Reagent B）
9．强力涡旋震荡30秒，充分混匀
10．放进冰槽里孵育30分钟，期间每10分钟强力涡旋震荡30秒（注意：如需暂时停止，放进－70℃冰箱里储存备用）
11．即刻放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g
12．小心移取上清液到新的无菌的1.5毫升离心管
13．放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用

二、标准样品准备
1．设置好冷光仪：温度25℃，1秒延时（Delay），1秒整合（Integration）检测。同时关上操作室的灯光
2．准备好8个无菌的1.5毫升离心管，标记为1至8号管
3．按下表分别加入适量的裂解液（Reagent B）到每个离心管
4．移取xx微升标准液（Reagent E）到1号管，混匀
5．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent E）到2号管，混匀
6．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent E）到3号管，混匀
7．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent E）到4号管，混匀
8．以此类推
9．将1至8号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号    裂解液（Reagent B）        标准液（Reagent E）        标准ATP浓度
1            xx微升                             xx微升                                  10－4摩尔/升
2            xx微升                            xx微升1号管                         10－5摩尔/升
3            xx微升                            xx微升2号管                         10－6摩尔/升
4            xx微升                            xx微升3号管                         10－7摩尔/升
5            xx微升                            xx微升4号管                         10－8摩尔/升
6            xx微升                            xx微升5号管                         10－9摩尔/升
7            xx微升                            xx微升6号管                         10－10摩尔/升
8            xx微升                            空白对照                                    0

三、活性测定
测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的缓冲液（Reagent C）置入冰槽里融化，然后移出500微升到新的1.5毫升离心管，加入xx微升反应液（Reagent D），轻柔混匀后，置于冰槽里，标记为反应工作液，放在暗室冰槽里备用。然后进行下列操作。
1．准备1个黑色96孔板，并做好标记：包括背景空对照孔，标准样品对照孔，以及待测样品孔
2．分别加入xx微升裂解液（Reagent B）、稀释的标准液（Reagent E）和待测样品到相应孔里
3．分别加入xx微升反应工作液到所有孔里
4．室温下（25℃）孵育3分钟，避免光照
5．即刻放进冷光仪检测：1秒延时，1秒检测
6．获得相对发光单位（Relative Light Unit；RLU）：标准样品对照孔或待测样品孔RLU－背景空对照孔RLU
7．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对发光单位（RLU）；横座标（X轴）为标准ATP浓度（摩尔/升）
8．计算样品ATP浓度：根据标准曲线测算
 
注意事项
1．本产品为50次操作
2．本产品检测敏感度达10-12摩尔/升
3．用户根据实际情况，选择5管标准区间范围
4．所有操作均须无菌状态下进行
5．操作时，须戴手套
6．建议每个样品安排3个孔，即重复3次，计算时取其平均值
7．反应液（Reagent D）具有光高度敏感性，因此整个操作须避光进行，避免反复冻融
8．由于ATP无处不在，且热稳定性。建议使用的枪头、用具须严格无菌，避免重复使用；操作时避免污染试剂溶液，不得用手触摸试剂容器的内盖
9．如果用户没有冷光仪，可以使用闪烁探测器（scitillation counter 或β计数器）替代，但敏感性较低
10．如果样品ATP浓度较低，可以整合检测至10秒
11．如果是注射式冷光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗冷光仪注射（injector）管道
12．本公司提供系列ATP检测试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称            规格        
G&VS10050.2    组织ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次        
G&VS10050.2A    清理液（Reagent A）            毫升
G&VS10050.2B    裂解液（Reagent B）            毫升
G&VS10050.2C     缓冲液（Reagent C）            毫升
G&VS10050.2D     反应液（Reagent D）        毫升
G&VS10050.2E    标准液（Reagent E）            微升

试剂盒订购信息
产品编号            名称            规格
G&VS10050.1    细胞ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次
G&VS10050.2    组织ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次
G&VS10051    ATP生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    50次
G&VS60046    细菌ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次
G&VS16012    植物ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次
G&VS19035.1    食物污染ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次
G&VS19035.2    饮料污染ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次
G&VS19035.3    水质污染ATP生物发光法定量检测试剂盒    50次