PicoGreen 细胞繁殖定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
PicoGreen细胞繁殖定量检测试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与细胞中双链DNA的高 度特异性结合而产生荧光信号来精确定量测定微量细胞或缓慢有丝分裂细胞繁殖的权威而经典的技术方  法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物或人体原代细胞、生长变化极为 缓慢且微量的培养细胞，以及在ECM上生长的细胞。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。

技术背景
作为 DNA 染色剂之一的 PicoGreen 荧光染料特异性地与细胞中双链 DNA 结合作为细胞繁殖的依据，避免 了通过不稳定的细胞代谢(MTT 等) 来衡量细胞增长的缺陷。 PicoGreen 技术可以检测到低达 0.5 纳克双链 DNA 或 100 个细胞量级的变化。细胞数的微量增加引起荧光信号强度(Intensity) 或相对荧光单位(RFU) 的显著增加。其自发荧光(Autofluorescence)忽略不计，重复性标准差异(Standard  Deviation) 低，不受 样品化学成分的干扰， 适合于 ECM 包被的培养板的细胞测定和原代细胞测定， 例如人体甲状腺滤泡细胞、 成人心室肌细胞、成人上皮细胞、肝细胞和神经元细胞等。

产品内容
清理液(Reagent A)    毫升
裂解液(Reagent B)    毫升
染色液(Reagent C)    微升
稀释液(Reagent D)    毫升
标准液(Reagent E)    微升
产品说明书    1 份

保存方式
保存 染色液(Reagent C)和 标准液(Reagent E)在－20℃冰箱里， 其余的保存在4℃ 冰箱里， 染色液(Reagent C)避免光照，有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于染色工作液配制的容器
96 孔板荧光酶标仪：用于定量检测染色后的荧光细胞

实验步骤
实验开始前， 将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent C) 置于冰槽里融化。然后移出 1 毫升 稀释液 (Reagent D) 到新的 1.5 毫升离心管， 加入 xx 微升 染色液 (Reagent C)， 混匀后，用锡纸包裹，标记为 染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

一、  构建标准细胞曲线
1 ．  从－20℃冰箱里的标准液(Reagent E) 系列置于冰槽里融化
2 ．  分别移取 100 微升 1 号至 5 号 标准液(Reagent E) 到 96 孔板的相应标准样品孔里

管号    标准液(Reagent E)    染色工作液 用量    标准 DNA 总量    细胞数
1 号    微升        微升        纳克        0
2 号    微升        微升        纳克        102
3 号    微升        微升        纳克        103
4 号    微升        微升        纳克        104
5 号    微升        微升        纳克        105

3 ．  分别加入 100 微升含有 染色液(Reagent C)和 稀释液(Reagent D)的 染色工作液
4 ．  室温下，孵育 5 分钟，避免光照
5 ．  即刻放进荧光酶标仪测读：滤波器激发波长 480nm，散发波长 530nm，闪烁次数 10，间隔时间 0.5 秒
6 ．  绘制标准细胞曲线：纵座标(Y 轴)为相对荧光单位(RLU)；横坐标(X 轴)为细胞数或 DNA 浓度

二、  样品检测
1．  从细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板
2．  小心抽去每孔中的培养液
3．  小心加入 xx 微升 清理液(Reagent A) 到 96 孔板中样品孔里
4．  小心抽去每孔中的 清理液(Reagent A)
5．  小心加入 xx 微升 裂解液(Reagent B) 到 96 孔板中样品孔里
6．  放进 37C培养箱里孵育 10 分钟
7．  小心加入 xx 微升含有 染色液(Reagent C) 和 稀释液 (Reagent D) 的 染色工作液到96 孔板中样品孔里
8．  室温下，孵育 5 分钟，避免光照
9．  即刻放进荧光酶标仪测读：滤波器激发波长 480nm，散发波长 530nm，闪烁次数 10，间隔时间 0.5 秒
10．绘制细胞生长曲线： 纵座标(Y 轴) 为相对荧光单位(RLU)；横坐标(X 轴) 为时间点或药物处理浓 度
11．或者：如果需要精确计算细胞数的变化，使用上述标准曲线

注意事项
1 ．  本产品为 60 次(96 孔细胞培养板)操作，其中包括 10 次标准曲线测定
2 ．  操作时，须戴手套
3 ．  使用新鲜配制的 染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光
4 ．  建议使用塑料管配制 染色工作液，而不是玻璃制品
5 ．  孵育时，避免光照
6 ．  标准曲线测定，可视需要而定：如果需要了解精确细胞数的变化，建议构建标准曲线
7 ．  系统检测，标准曲线测定 1 次即可；如果酶标仪更换，则需要重新测定 1 次
8 ．  建议测定细胞数范围在 102至 105之间
9 ．  如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量
10．可以使用 xx 微升比色杯检测，而 1 毫升比色杯检测，则试剂用量相应增加： 1 毫升比色杯包括 xx 微 升含有 染色液(Reagent C) 和 稀释液(Reagent D) 的 染色工作液 ＋xx 微升含有 裂解液(Reagent B) 的样品
11．盐类、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链 DNA 和 RNA 不会干扰检测
12．本公司提供系列细胞繁殖检测试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定高度敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称                规格
G&VS10045    PicoGreen 细胞繁殖定量检测试剂盒    60 次
G&VS10045A    清理液(Reagent A)            100 毫升
G&VS10045B    裂解液(Reagent B)            100 毫升
G&VS10045C    染色液(Reagent C)            500 微升
G&VS10045D    稀释液(Reagent D)            100 毫升
G&VS10045E    标准液(Reagent E)            5 X 1  毫升

产品编号        产品名称                规格
G&VS10007    结晶紫细胞群落染色试剂盒        250 次
G&VS10008    细胞活力蓝色荧光检测试剂盒        50 次
G&VS10009    细胞活力台盼蓝染色试剂盒        100 次
G&VS10029    中性红细胞繁殖比色法定量检测试剂盒    500 次
G&VS10039    MTT 比色法细胞繁殖测定试剂盒        500 次
G&VS10043    MTS 细胞繁殖定量检测试剂盒        500 次
G&VS10044    绿色荧光细胞繁殖定量检测试剂盒    500 次
G&VS10045    PICOGREEN 细胞繁殖定量检测试剂盒    50 次
G&VS10046    G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒        50 次
G&VS10051    ATP 生物发光法法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    50 次
G&VS10052    R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒        100 次
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G&VS10034    BrdU 标记法细胞繁殖显微镜检测试剂盒    10 次
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G&VS10086    磺酰罗丹明B  (Sulforhodamine B)细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    500 次
G&VS10087    考马斯亮蓝细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    500 次
G&VS10036    XTT比色法细胞繁殖测定试剂盒        500 次