通用型内质网形态染色试剂盒产品说明书

主要用途
通用型内质网形态染色试剂是一种旨在通过亲脂性短链羰花青阳离子荧光染料选择性地聚集在内质网，并呈现绿色，用于分析和观察内质网活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种内质网（动物、人体、植物、昆虫等）的形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景
内质网（endoplasmic reticulum，ER）是细胞内的一个精细的膜系统，两膜间是扁平的腔、囊或池，交织分布于细胞质中。内质网分两类，一类是膜上附着核糖体颗粒的叫粗糙型内质网，另一类是膜上光滑的，没有核糖体附在上面，叫光滑型内质网。粗糙型内质网的功能是合成蛋白质大分子，并把它从细胞输送出去或在细胞内转运到其他部位。凡蛋白质合成旺盛的细胞，粗糙型内质网便发达。在神经细胞中，粗糙型内质网的发达与记忆有关。光滑型内质网的功能与糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。内质网荧光探针二已基恶羰花青碘化物（3,3-Dihexyloxacarbocyanine iodide）是亲脂性短链羰花青（carbocyanine）阳离子荧光染料，可选择性的与负电性的膜结构结合。并自由通过细胞膜，选择性地聚集在内质网。它可以对活细胞进行直接染色，在激发波长488nm，散发波长505nm可以清晰看到被染成绿色的网状细胞器。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
固着液（Reagent B）        毫升
预备液（Reagent C）        微升
染色液（Reagent D）    微升
产品说明书        1份

保存方式
保存染色液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月

用户自备
完全细胞培养液：用于染色后培养液更换
24孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
微型台式离心机：用于沉淀细胞
培养箱：用于染色孵育
（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞荧光分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent D）置入冰槽里融化，然后分别移出xx微升预备液（Reagent C）和5微升染色液（Reagent D）到新的1.5毫升离心管，标记为染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。
一、贴壁细胞标准染色
1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％
（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12）
2．小心抽去细胞培养液
3．小心沿着孔壁加入500微升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4．小心加入xx微升含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项8和9）
5．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟
6．小心抽去含有染色工作液的细胞培养液
7．小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔
8．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长488nm，散发波长505nm（内质网呈现绿色）

二、贴壁细胞快速染色
1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％
（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12）
2．直接加入xx微升含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液到1毫升培养液里，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项8和9）
3．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟
4．小心抽去含有染色工作液的细胞培养液
5．小心沿着孔壁加入1毫升37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔
6．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长488nm，散发波长505nm（内质网呈现绿色）

三、悬浮细胞或脱离细胞染色
1．将悬浮细胞或脱离细胞（1 X 106细胞）移入到1.5毫升离心管
2．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
3．小心抽去上清液
4．加入500微升用户自备的37℃预热的完全细胞培养液
5．加入xx微升含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液，充分混匀（注意：参见注意事项9和10）
6．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟
7．放进微型台式离心机离心1分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
8．小心抽去上清液
9．加入100微升用户自备的37℃预热的完全细胞培养液，混匀
10．移出5微升到载玻片上，放上盖玻片
11．（选择步骤）如果需要双重染色，移出3.5微升染色细胞到载玻片上
12．（选择步骤）加入1微升用户需测的第二染料，放上盖玻片
13．（选择步骤）放进37℃细胞培养箱里孵育10分钟
14．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长488nm，散发波长505nm（内质网呈现绿色）

四、细胞双重染色
1．准备1个载玻片培养皿的待测细胞
2．小心抽去细胞培养液
3．小心加入xx微升37℃预热的清理液（Reagent A）
4．小心加入xx微升固着液（Reagent B），小心摇动培养皿，使其混匀
5．放进37℃细胞培养箱里孵育15分钟
6．小心抽去含有固着液（Reagent B）的清理液（Reagent A）
7．小心加入xx毫升37℃预热的清理液（Reagent A）
8．小心抽去清理液（Reagent A）
（注意：由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或膜不通透性荧光染料的通透和标记）
9．小心加入xx毫升清理液（Reagent A）
10．小心加入xx微升含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液，小心摇动培养皿，使其混匀（注意：参见注意事项8和9）
11．室温下孵育10至30秒钟
12．即刻抽去含有染色工作液的清理液
13．小心加入xx微升清理液（Reagent A）
14．小心抽去清理液（Reagent A）
15．盖上盖玻片
16．即刻在10分钟内置于荧光显微镜下进行观察

五、细胞固定染色
1．准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％
（注意：可以使用载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12）
2．小心抽去细胞培养液
3．小心沿着孔壁加入500微升用户自备的37℃预热的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4．小心加入xx微升固着液（Reagent B），小心摇动培养板，使其混匀
5．室温下孵育5分钟
6．小心抽去含有固着液（Reagent B）的细胞培养液
7．小心加入xx微升清理液（Reagent A）
8．小心抽去清理液（Reagent A）
9．再加入xx微升清理液（Reagent A）
10．小心加入xx微升含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液，小心摇动培养板，使其混匀（注意：参见注意事项9）
11．室温下孵育10至30秒钟
12．即刻抽去含有染色工作液的清理液（Reagent A）
13．加入xx微升清理液（Reagent A）
14．小心抽去清理液（Reagent A）
15．再加入xx微升清理液（Reagent A）
16．即刻在10分钟内置于倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长488nm，散发波长505nm（内质网呈现绿色）

六、切片染色
1． 准备1个待测的切片样品
2．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖切片表面
3．小心移去切片上的清理液（Reagent A）
4．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖切片表面
5．小心加入xx微升固着液（Reagent B）
6．室温下孵育5分钟
7．小心移去切片上的固着液（Reagent B）
8．小心加上xx微升清理液（Reagent A），覆盖切片表面
9．小心移去切片上的清理液（Reagent A）
10．移取xx微升清理液（Reagent A）到新的1.5毫升离心管
11．加入xx微升含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液，混匀（注意：参见注意事项9）
12．小心加上上述染色工作液到切片上，覆盖切片表面
13．室温下孵育10至30秒钟
14．即刻移去切片上的染色工作液
15．小心加上xx微升新鲜的清理液（Reagent A）
16．小心移去清理液（Reagent A）
17．盖上盖玻片
18．即刻在10分钟内置于荧光显微镜下进行观察：激发波长488nm，散发波长505nm（内质网呈现绿色）

注意事项
1．本产品为25次（固定染色）和50次（活体染色）操作
2．所有操作均须无菌状态下进行
3．操作时，须戴手套
4．孵育时，必须避免光照
5．剩余的染色工作液可放进－20℃储存备用
6．本产品适合活体染色和固定染色，染色剂不易洗掉，染色持久
7．固定染色后，须在10分钟后完成观察，否则出现自发荧光或染料聚集在溶酶体
8．活细胞染色：1毫升体系可以使用10微升（1：100容量比）含有预备液（Reagent C）和染色液（Reagent D）的染色工作液
9．根据不同细胞类型，可以调整染色工作液的使用剂量
10．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析
11．如果没有匹配的散发波长滤波器，可以使用500至530nm的任一波长
12．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：

操作容器        建议操作体系
载玻片        100微升
载玻片培养皿    1毫升
35mm培养皿    1毫升
96孔培养板    100微升
48孔培养板    200微升
24孔培养板    500微升
12孔培养板    1毫升
6孔培养板        2毫升
25cm2细胞培养瓶    3毫升

13．如果需要高度特异性内质网染色，建议使用内质网形态高质染色试剂盒－G&VS10041.2
14．本公司提供系列内质网分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称            规格        
G&VS10041.1    通用型内质网形态染色试剂盒        50次
G&VS10041.1A    清理液（Reagent A）            毫升
G&VS10041.1B     固着液（Reagent B）            毫升
G&VS10041.1C    预备液（Reagent C）            毫升
G&VS10041.1D     染色液（Reagent D）        毫升

试剂盒订购信息
产品编号            名称            规格
G&VS10005    亚细胞结构分离试剂盒        10次
G&VS10040.1    内质网分离试剂盒            10次
G&VS10040.2    内质网高质纯化试剂盒        10次
G&VS10041.1    通用型内质网形态染色试剂盒        100次
G&VS10041.2    内质网形态高质染色试剂盒        20次
G&VS10066.1    动物组织肌质网粗提分离试剂盒        10次
G&VS10066.2    动物组织活性肌质网分离试剂盒        10次
G&VS10066.3    动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒    10次
G&VS10066.4    动物组织肌质网横小管（T Tube）分离试剂盒    10次
G&VS10066.5    动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒    10次
G&VS10100    动物细胞核分离试剂盒        50次
G&VS10117    细胞微管分离试剂盒            10次
G&VS10118    细胞溶酶体分离试剂盒        10次
G&VS10119    细胞过氧化酶体分离试剂盒        10次
G&VS10121    细胞溶酶体形态染色试剂盒        20次