动物血液多核白细胞分离试剂盒产品说明书

主要用途
动物血液多核白细胞分离试剂是一种旨在通过聚糖和泛影葡胺混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的多核白细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于多核白细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。本产品适合于大鼠、小鼠、兔子、禽类等动物腹腔液（peritoneal fluid）、骨髓、外周血的多核白细胞分离。产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。

技术背景
全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。为了获得纯化完整的多核白细胞，采用English和Adersen（1974）的聚糖和泛影葡胺混合液比重（1.119克/毫升）或PERCOLL比重（1.137）离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。

产品内容
高比重液（Reagent A）    毫升
低比重液（Reagent B）    毫升
产品说明书        1份

保存方式
保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备
PBS缓冲溶液（G&VS12033）：用于清洗多核白细胞
白细胞完全培养液（G&VS12052.1）：用于分离后白细胞的培养
白细胞冻存液（G&VS10001.2）：用于分离后白细胞的长期保存
15毫升锥形离心管：用于细胞分离操作的容器
50毫升锥形离心管：用于细胞清洗操作的容器
2毫升无菌塑料吸管：用于抽吸多核白细胞层液体
台式离心机：用于沉淀细胞

实验步骤
实验开始前，室温预热试剂溶液。然后进行下列操作。
1．准备1个无菌的15毫升锥形离心管
2．加入xx毫升高比重液（Reagent A）
3．小心沿着管壁，接近高比重液（Reagent A）层面，非常缓慢地加入xx毫升低比重液（Reagent B）
4．小心沿着管壁，接近低比重液（Reagent B）层面，非常缓慢地加入6毫升新鲜的EDTA抗凝的全血样品在低比重液（Reagent B）上面（注意：切记不要搅浑低比重液（Reagent B））
5．室温下（25℃），小心放进台式离心机离心30分钟，速度为700g（注意：离心机设置加速和制动均为零）
6．小心取出离心管，切记不要震动
7．可见：最上层为血浆（为淡红色通明），其次为单核白细胞（为薄薄的致密白色环状层），然后为低比重液层，再下为多核白细胞（为薄薄的致密白色环状层），底层之上为高比重液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层
8．小心抽掉多核白细胞的白色环状层以上三分之二液体，切记不要搅动多核白细胞白色环状层
9．用2毫升无菌塑料吸管小心吸取多核白细胞白色环状层液体（0.5毫升）
10．移入到新的无菌的50毫升锥形离心管
11．加入48毫升用户自备的PBS缓冲溶液
12．轻柔上下倾倒混匀
13．放进台式离心机离心10分钟，速度为200g
14．小心倒掉上清液
15．用手指轻弹离心管2至3下，使白细胞颗粒群松动
16．（选择步骤）加入5毫升用户自备的白细胞完全培养液，进行细胞培养
17．（选择步骤）或加入1毫升用户自备的白细胞冻存液，放进－80℃冻存
18．（选择步骤）或即刻进行各种后续实验（包括多核白细胞分离、鉴定、染色、标记、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等）

注意事项
1．本产品为10次操作（6毫升全血/次）
2．所有操作均须无菌状态下进行
3．操作时，须戴手套
4．操作时，在室温下进行
5．使用时，切莫污染母液
6．建议使用新鲜全血
7．全血样品采集须使用血液抗凝液 （参见订购信息）
8．如果血液出现凝块，不宜进行分离操作
9．全血样品和高比重液（Reagent A）与低比重液（Reagent B）相加的使用比例为，即xx毫升全血，加xx毫升高比重液（Reagent A）和xx毫升低比重液（Reagent B）；如需要增加或减少全血量，则按比例相应增加或减少高比重液（Reagent A）与低比重液（Reagent B）
10．本产品细胞回收率70％以上，细胞存活率98％以上
11．本公司提供系列血液研究试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定分离细胞活性保证

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                规格        
G&VS10038.5    动物血液多核白细胞分离试剂盒            10次
G&VS10038.5A    高比重液液（Reagent A）            100毫升
G&VS10038.5B    低比重液液（Reagent B）            100毫升
G&VS12033    PBS缓冲溶液                500毫升

产品编号            名称            规格
G&VS12031.1    血红细胞溶解液            500毫升
G&VS12031.2    陈旧血红细胞溶解液            500毫升
G&VS12031.3    血红细胞直接溶解液            500毫升
G&VS10031    EB病毒介导永生化淋巴细胞克隆试剂盒    10次
G&VS10038.1    血白细胞分离试剂盒            10次
G&VS10038.2    单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒        10次
G&VS10038.3    多核白细胞分离试剂盒        10次
G&VS10038.4    动物单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒    10次
G&VS10038.5    动物多核白细胞分离试剂盒        10次