CAT#:JW-210101
低温运输，-20℃保存

单碱基延伸试剂盒

产品及特点
本产品是单碱基延伸（Single Base Extension，SBE）试剂盒，用于测定核酸中特定位置的碱基，常跟质谱等能分辨一个碱基差异的后续研究结合使用。在进行SBE反应中，SBE引物与靶核酸样品杂交。在聚合酶和双脱氧核苷酸的作用下，SBE引物的3’末端以靶分子为模板延伸一个碱基。如果该靶位点有突变，则延伸一个碱基，因此它们的分子量将有一个碱基的差异，这个分子量差异可以通过质谱等方法检测出来。SBE技术的示意图如下：

本产品就是基于上述原理开发，它具有下列特点：
1.即开即用，不用自行优化实验条件。
2.选择专一的SBE专用DNA聚合酶，专一性强，非特异添加率低。
3.提供4种ddNTP，方便用户检测所需的任何位点；ddATP、ddCTP、ddTTP及ddGTP的分子量分别为：541.13、517.10、532.11及557.13。
4.跟后续的质谱（如MALDI-TOF）等检测方法兼容。
5.本产品足够100次单碱基延伸。
6.本产品只可用于科研。
规格及成分
成份                                               编号                    规格       包装
ddATP Solution，1mM                11-220883        100 μL    0.5 mL白盖管
ddTTP Solution，1mM                11-220884        100 μL    0.5 mL本色管
ddGTP Solution，1mM                11-220885        100 μL    0.5 mL蓝盖管
ddCTP Solution，1mM                11-220886        100 μL    0.5 mL紫盖管
SBE专用DNA聚合酶                    210101a          100 μL    0.5 mL红盖管
10×SBE缓冲液                             210101b          100 μL    0.5 mL绿盖管
SBE终止液（EDTA 0.2mM）      210101c           100 μL    0.5 mL黄盖管
使用手册                                      210101sc          1份                无
本产品使用十孔盒包装

运输及保存
低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备物品
SBE模板，SBE引物。

使用方法
1.在0.2 mL微量离心管中按下表设置一个10 μL体系的SBE反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度）：
成份                    用量
自备SBE模板    25 μM
自备SBE引物
（如果3’端第一个共价键使用硫代Phosphorothioate修饰，则修饰引物比常规引物专一性更强）    10 μM
四种ddNTP选一种    1 μL
10×SBE缓冲液        1 μL
补超纯水到9 mL         -
SBE专用DNA聚合酶    1 μL
合计                                10 μL
2.37℃反应3小时。一定要使用热盖已经开启的PCR仪进行保温。
3.加入1 mL SBE终止液（EDTA 0.2mM），吹打混匀。
4.95℃反应5分钟灭活酶。
5.去除盐离子和蛋白之后，可以用于后续的MALDI-TOF。本产品不含相关试剂。

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