XTT 比色法细胞繁殖测定试剂盒产品说明书

主要用途
XTT比色法细胞繁殖测定试剂是一种旨在通过可溶性四氮唑XTT和电子偶联化合物在代谢旺盛 细胞中的脱氢酶的作用下，产生水溶性桔红色甲簪产物，作为检测信号来比色定量测定活体细胞繁殖状况 的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。替代传统的操作繁琐和有 害物质同位素[3H]-thymidine或[51Cr]释放检测。适用于各种生长中的动物、人体、酵母、细菌等细胞以及细 胞毒力检测。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰，具有高通量功能。

技术背景
在细胞生物学中，细胞繁殖检测常常用于研究生长因子、细胞因子、营养因子、化学物、以及淋巴细胞的 激活和毒力作用。作为细胞染色剂之一的黄色四氮唑(tetrazolium)，XTT(sodium 3-[1-(phenylaminocarbonyl)- 3, 4-[tetrazolium]-bis (4- methoxy-6-nitro) benzene sulfonic acid hydrate])和电子偶联化合物染料可以自由地进 入活细胞中。细胞繁殖快， 其代谢旺盛， 线粒体内脱氢酶的活性增强， 从而还原细胞浆中的染料为无毒性、 水溶性、桔红色产物而留存在细胞内，在 450nm 波长下产生吸收峰：吸收峰值值与细胞量成线性正相关。 这是继不溶性 MTT 染料检测后的更新换代的产品。

产品内容
染色液(Reagent A)
结合液(Reagent B)
产品说明书

保存方式
保存在－20℃冰箱里，避免光照和反复冻融；有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于直接法染色工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
酶标仪：用于定量检测染色后的细胞

实验步骤
实验开始前， 将－20℃冰箱里的试剂盒中的GENMED染色液(Reagent A) 和GENMED结合液(Reagent B)
在室温下融化。然后移出XX毫升GENMED染色液(Reagent A) 和XX微升GENMED结合液(Reagent B)
到新的1.5毫升离心管，混匀后，在室温下静置，并标记为GENMED染色工作液，放在暗室里。然后进行 下列操作。
1 ．  从细胞培养箱里取出待测的 96 孔细胞培养板
2 ．  确保 96 孔板中每一个孔含有 100 微升细胞培养液
3 ．  小心加入XX微升 染色工作液到96 孔板中每一个孔里
4 ．  放进 37℃培养箱里， 孵育 4 小时， 或直至呈现桔红色(注意： 对于不敏感细胞或生长缓慢细胞， 可以 延长孵育时间)
5 ．  轻轻摇动培养板，混匀
6 ．  即刻放进酶标仪测读：波长 450nm

注意事项
1 ．  本产品为 500 次操作
2 ．  操作时须戴手套
3 ．  如果 染色液(Reagent A) 和 结合液(Reagent B) 出现沉淀，置于 37℃恒温水 槽孵育，轻度混匀，直至沉淀消失
4 ．  使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过 2 小时，且注意避光
5 ．  整个操作须无菌操作
6 ．  可以使用排枪操作
7 ．  建议 96 孔板里的细胞量在 5000 至 500000 范围为理想状态
8 ．  孵育时，须避光
9 ．  试剂使用后，即刻放回冰箱保存
10．不同细胞对于染料的敏感性不同，因此必要时，可以延长孵育时间，但最长不宜超过 24 小时
11．某些低代谢细胞例如淋巴细胞、角化细胞(keratinocyte)、黑色素细胞(melanocyte) 为不敏感细胞， 细胞量须在 25000 至 250000 范围为理想状态，并需要延长孵育时间
12．对于敏感细胞，不要过度孵育，否则降低检测的敏感性
13．背景吸收值为 0.1－0.2 为理想状态
14．如果没有 450nm 波长的滤波器，可以使用450 至 500nm 之间任一波长替代
15．避免使用具有酚红的培养液；如果不可避免，必需设定培养液空白对照
16．本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂盒

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称            规格   
G&VS10036    XTT 比色法细胞繁殖测定试剂盒        500 次  
G&VS10036A    染色液(Reagent A)            100 毫升
G&VS10036B    结合液(Reagent B)            5 毫升

产品编号            产品名称            规格
G&VS10007    结晶紫细胞群落染色试剂盒        250 次
G&VS10008    细胞活力蓝色荧光检测试剂盒        50 次
G&VS10009    细胞活力台盼蓝染色试剂盒        100 次
G&VS10029    中性红细胞繁殖比色法定量检测试剂盒    500 次
G&VS10039    MTT 比色法细胞繁殖测定试剂盒        500 次
G&VS10043    MTS 比色法细胞繁殖定量检测试剂盒    500 次
G&VS10044    绿色荧光细胞繁殖定量检测试剂盒    500 次
G&VS10045    PICOGREEN 细胞繁殖定量检测试剂盒    50 次
G&VS10046    G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒        50 次
G&VS10051    ATP 生物发光法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    50 次
G&VS10052    R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒        100 次
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G&VS10034    BrdU 标记法细胞繁殖显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10073    乳酸脱氢酶(LDH)释放法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    100 次
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G&VS10084    葡萄糖耗损法细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    500 次
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G&VS10086    磺酰罗丹明B  (Sulforhodamine B)细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    100 次
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G&VS10036    XTT比色法细胞繁殖测定试剂盒        500 次
G&VS10122    水溶性四氮唑－1  比色法细胞繁殖测定试剂盒    500 次
G&VS10123    水溶性四氮唑－8  比色法细胞繁殖测定试剂盒    500 次
G&VS10133    酚藏花红 (PHENOSAFRANINE)植物细胞繁殖测定试剂盒    100 次