BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒产品说明书

主要用途
 BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖NBT显色检测试剂是一种旨在使用免疫抗体显色技术，即通过抗BrdU单克隆抗体以及碱性磷酸酶缀合物二抗，通过染料NBT/BCIP染色显示紫蓝色后，分析经过BrdU标记预处理（即使用溴脱氧尿嘧啶核苷替代脱氧胸腺嘧啶核苷整合到组织中合成的DNA链）的存档中的冰冻组织切片，其DNA合成水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于BrdU标记预处理的组织（动物、人体、植物等）的DNA合成分析。广泛用于细胞繁殖，包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景
溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine；BrdU）是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入DNA合成期（S期）细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性BrdU存在，应用BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动力学问题。自82年Gratzer制备出抗BrdU单抗及标记检测技术后，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）相似，而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检测其标记，反映细胞繁殖、细胞周期和DNA合成以及含量等。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
固着液（Reagent B）        毫升
封阻液（Reagent C）        毫升
抗体液（Reagent D）    毫升    
二抗液（Reagent E）        毫升
染色液（Reagent F）        毫升
产品说明书        1份

保存方式
保存在－20℃冰箱里；抗体液（Reagent D）和二抗液（Reagent E）严禁反复冻融；染色液（Reagent F）避免光照；有效保证6月

用户自备
盖玻片：用于封片孵育
培养箱：用于组织细胞染色孵育
光学显微镜：用于组织细胞染色观察

实验步骤
一、动物BrdU标记预处理（建议使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）溶液－G&VS12194）
方法一：30微克BrdU/克动物体重，静脉注射，1小时后，手术取出组织，然后进行冰冻切片处理
方法二：先手术取出组织，浸泡在BrdU液体里，37℃孵育60分钟，清洗数次，然后进行冰冻切片处理
 
二、免疫染色处理
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1．取出待测的3至5微米厚的BrdU标记预处理过的冰冻组织切片
2．加上xx微升清理液（Reagent A），铺满切片表面
3．小心抽去清理液（Reagent A）
4．加上xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent B）
5．置于－20℃冰箱里孵育20分钟
6．小心抽去固着液（Reagent B）
7．空气中晾干
8．加上xx微升清理液（Reagent A），铺满切片表面
9．室温下孵育2分钟
10．小心抽去清理液（Reagent A）
11．加上xx微升封阻液（Reagent C），铺满切片表面
12．置于37℃培养箱里孵育30分钟，保持湿润
13．小心抽去封阻液（Reagent C）
14．加上xx微升抗体液（Reagent D），铺满切片表面
15．盖上盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟（注意：避免气泡）
16．小心移去盖玻片，抽去抗体液（Reagent D）
17．加上xx微升清理液（Reagent A），铺满切片表面
18．置于37℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
19．小心抽去清理液（Reagent A）
20．重复实验步17至19二次
21．加上xx微升二抗液（Reagent E），铺满切片表面
22．盖上新的盖玻片，置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照（注意：避免气泡）
23．小心移去盖玻片，抽去二抗液（Reagent E）
24．加上xx微升清理液（Reagent A），铺满切片表面
25．置于37℃培养箱里孵育5分钟，保持湿润
26．小心抽去清理液（Reagent A）
27．重复实验步24至26二次
28．加上xx微升染色液（Reagent F），铺满切片表面
29．置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照，或直至紫蓝色呈现（注意：避免气泡）
30．抽去染色液（Reagent F）
31．加上xx微升清理液（Reagent A），铺满切片表面
32．小心抽去清理液（Reagent A）
33．重复实验步31至32一次
34．盖上盖玻片或封片
35．即刻在光学显微镜下观察：阳性组织细胞呈现紫蓝色
 
注意事项
1．本产品为10次操作量
2．在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
4．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
5．孵育时，须避免光照
6．建议组织细胞染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
7．本公司提供系列细胞凋亡和衰老检测试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定显色清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                规格        
G&VS10034.5    BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒    10次
G&VS10034.5A     清理液（Reagent A）                毫升
G&VS10034.5B     固着液（Reagent B）                毫升
G&VS10034.5C     封阻液（Reagent C）                毫升
G&VS10034.5D     抗体液（Reagent D）            毫升
G&VS10034.5E     二抗液（Reagent E）                毫升
G&VS10034.5F    染色液（Reagent F）                毫升

试剂盒订购信息
产品编号            名称                    规格
G&VS10033.1    BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒            10/20次
G&VS10033.2    BrdU标记法细胞繁殖比色法定量检测试剂盒            10/50 次
G&VS10033.3    BrdU标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂盒            10/50 次
G&VS10034.1    BrdU标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒        10/20次
G&VS10034.2    BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.3    BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.4    BrdU标记法载玻片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒        10/20次
G&VS10034.5    BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒        10/20次
G&VS10034.6    BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒        10/20次