BrdU 标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒产品说明书

主要用途
BrdU 标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂是一种旨在使用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)替 代脱氧胸腺嘧啶核苷(Thymidine)整合到合成的 DNA 链中，再运用抗 BrdU 单克隆抗体以及荧光染料缀 合物二抗，通过荧光显微镜评价 DNA  合成和细胞繁殖水平的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科 学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞(动物、人体、植物等)的 DNA  合成分析。 广泛用于细胞繁殖， 包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感， 操作简捷， 性能稳定，荧光清晰。

技术背景
溴脱氧尿嘧啶核苷(5－bromo－2－deoxyuridine；BrdU)是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺 入 DNA 合成期(S 期)细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性 BrdU 存在， 应用 BrdU  与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动 力学问题。自 82 年 Gratzer 制备出抗 BrdU 单抗及标记检测技术后， 应用BrdU 标记的敏感性已与氘胸腺嘧 啶核苷(3H-TdR) 相似， 而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检 测其标记，反映细胞繁殖、细胞周期和 DNA 合成以及含量等。

产品内容    
标记液(Reagent A)        微升
清理液(Reagent B)        毫升
固着液(Reagent C)        毫升
封阻液(Reagent D)        毫升
抗体液(Reagent E)        毫升
染色液(Reagent F)        毫升
复染液(Reagent G)        毫升
抗淬灭液(Reagent H)        微升
产品说明书        1 份

保存方式    
保存 标记液(Reagent A)、固着液(Reagent C)、封阻液(Reagent D)、抗体液(Reagent E)、染色液(Reagent F)、复染液(Reagent G)和 抗淬灭 液(Reagent H)在－20C冰箱里， 其余的保存在 4C冰箱里； 抗体液(Reagent E)和 染色液(Reagent F)严禁反复冻融； 标记液(Reagent A)、染色液(Reagent F)、复染液(Reagent G)和 抗淬灭液(Reagent H) 避免光照；有效保证 6 月

用户自备
60mm 细胞培养皿：用于细胞培养的容器
载玻片：用于细胞生长或涂片
盖玻片：用于封片孵育
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液(G&VS12024)：用于细胞脱离
完全细胞培养液(G&VS12052)：用于中和胰蛋白酶的处理
15 毫升锥形离心管：用于细胞收集的操作
台式离心机：用于细胞收集的操作
培养箱：用于细胞染色孵育
荧光显微镜：用于细胞荧光观察

实验步骤
方法一：载玻片贴壁细胞检测
实验开始前，将－20C冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1 ．  准备 1 个 60 mm细胞培养皿，内置 1 个载玻片或盖玻片
2 ．  接种待测细胞(2 X 106细胞)，直至细胞铺满率达到 50％
3 ．  小心抽去细胞培养液
4 ．  加入 xx 毫升新鲜的用户自备的完全细胞培养液
5 ．  加入 xx 微升 标记液(Reagent A)，避免光照
6 ．  轻轻摇动培养板，混匀
7 ．  放进 37C细胞培养箱孵育 90 分钟，避免光照
8 ．  小心抽去含有 标记液(Reagent A) 的细胞培养液
9 ．  加入 xx 毫升 清理液(Reagent B)，铺满培养表面
10．小心抽去 清理液(Reagent B)
11．重复实验步骤 9 至 10 二次
12．加入 5 毫升－20C预冷的 固着液(Reagent C)
13．置于－20C冰箱里孵育 20 分钟
14．小心抽去 固着液(Reagent C)
15．空气中晾干
16．加入 xx 微升 清理液(Reagent B)，铺满载玻片培养表面
17．室温下孵育 2 分钟
18．小心抽去 清理液(Reagent B)
19．加入 xx 微升 封阻液(Reagent D)，铺满载玻片培养表面
20．置于 37C培养箱里孵育 30 分钟，保持湿润
21．小心抽去 封阻液(Reagent D)
22．加入 xx 微升 抗体液(Reagent E)，铺满载玻片培养表面
23．盖上盖玻片，置于 37C培养箱里孵育 30 分钟(注意： 避免气泡)
24．小心移去盖玻片，抽去 抗体液(Reagent E)
25．加入 xx 微升 清理液(Reagent B)，铺满载玻片培养表面
26．置于 45C培养箱里孵育 5 分钟，保持湿润
27．小心抽去 清理液(Reagent B)
28．重复实验步 25 至 27 二次
29．加入 xx 微升 染色液(Reagent F)，铺满载玻片培养表面
30．盖上新的盖玻片，置于 37C培养箱里孵育 30 分钟，避免光照(注意： 避免气泡)
31．小心移去盖玻片，抽去 染色液(Reagent F)
32．加入 xx 微升 清理液(Reagent B)，铺满载玻片培养表面
33．置于 45C培养箱里孵育 5 分钟，保持湿润
34．小心抽去 清理液(Reagent B)
35．重复实验步 32 至 34 二次
36．加入 xx 微升 复染液(Reagent G)，铺满载玻片培养表面
37．室温下孵育 3 分钟，避免光照
38．小心抽去 复染液(Reagent G)
39．加 xx 微升 抗淬灭液(Reagent H)
40．盖上盖玻片或封片
41．即刻在荧光显微镜下观察
    染色液(Reagent F)        复染液(Reagent G)
荧光染料    异硫氰酸荧光素(FITC)        二咪基联苯基吲哚(DAPI)
荧光颜色    绿色            蓝色
激发波长    488            350
散发波长    530            460
作用    BrdU 显示            核显示

方法二：悬浮细胞涂片检测
实验开始前，将－20C冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1 ．  准备 1 个 60 mm细胞培养皿的细胞(2 X 106细胞)
2 ．  直至细胞铺满率达到 50％
3 ．  小心抽去细胞培养液
4 ．  加入 xx 毫升新鲜的用户自备的完全细胞培养液
5 ．  加入 xx 微升 标记液(Reagent A)，避免光照
6 ．  轻轻摇动培养板，混匀
7 ．  放进 37C细胞培养箱孵育 90 分钟，避免光照
8 ．  小心抽去含有 标记液(Reagent A) 的细胞培养液
9 ．  加入 xx 毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液
10．放进 37C细胞培养箱孵育 1 分钟
11．加入 3 毫升用户自备的完全细胞培养液
12．移取细胞悬液到 15 毫升锥形离心管(注意： 悬浮细胞从这一步骤开始)
13．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为400g  (或 1500rpm，例如 EPPENDORF 5810R)
14．小心抽去上清液
15．加入 xx 毫升－20C预冷的 固着液(Reagent C)，混匀细胞颗粒群
16．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为400g  (或 1500rpm，例如 EPPENDORF 5810R)
17．小心抽去 固着液(Reagent C)
18．重复实验步骤 15 至 17 一次
19．加入 xx 微升 固着液(Reagent C)，混匀细胞颗粒群(注意： 可以长期保存在－20C冰箱里)
20．(选择步骤)细胞计数(使用GENMED固着液(Reagent C) 调整细胞到 1 X 107细胞/毫升)
21．使用 200 微升枪头移取细胞悬液，同时并排放上 5 至 10 张载玻片
22．从高达 30 至 60 厘米处向下滴上 1 至 3 滴细胞悬液在载玻片上，立即吹散开
23．(替代步骤)可以滴上 10 微升细胞悬液在载波片上，然后推片
24．室温下静置 10 分钟，或直至空气中晾干载玻片  (注意： 可以保存在70％酒精里，放进4C冰箱长达 数月)
25．加入 xx 微升 清理液(Reagent B)，铺满载玻片培养表面
26．室温下孵育 2 分钟
27．小心抽去 清理液(Reagent B)
28．加入 xx 微升 封阻液(Reagent D)，铺满载玻片培养表面
29．置于 37C培养箱里孵育 30 分钟，保持湿润
30．小心抽去 封阻液(Reagent D)
31．加入 xx 微升 抗体液(Reagent E)，铺满载玻片培养表面
32．盖上盖玻片，置于 37C培养箱里孵育 30 分钟(注意： 避免气泡)
33．小心移去盖玻片，抽去 抗体液(Reagent E)
34．加入 xx 微升 清理液(Reagent B)，铺满载玻片培养表面
35．置于 45C培养箱里孵育 5 分钟，保持湿润
36．小心抽去 清理液(Reagent B)
37．重复实验步 34 至 36 二次
38．加入 xx 微升 染色液(Reagent F)，铺满载玻片培养表面
39．盖上新的盖玻片，置于 37C培养箱里孵育 30 分钟，避免光照(注意： 避免气泡)
40．小心移去盖玻片，抽去 染色液(Reagent F)
41．加入 xx 微升 清理液(Reagent B)，铺满载玻片培养表面
42．置于 45C培养箱里孵育 5 分钟，保持湿润
43．小心抽去 清理液(Reagent B)
44．重复实验步 41 至 43 二次
45．加入 xx 微升 复染液(Reagent G)，铺满载玻片培养表面
46．室温下孵育 3 分钟，避免光照
47．小心抽去 复染液(Reagent G)
48．加入 xx 微升 抗淬灭液(Reagent H)
49．盖上盖玻片或封片
50．即刻在荧光显微镜下观察
    染色液(Reagent F)        复染液(Reagent G)
荧光染料    异硫氰酸荧光素(FITC)        二咪基联苯基吲哚(DAPI)
荧光颜色    绿色            蓝色
激发波长    488            350
散发波长    530            460
作用    BrdU 显示            核显示

注意事项
1 ．  本产品为 10 次操作量
2 ．  在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3 ．  孵育时，须避免光照
4 ．  载玻片必须非常洁净，且要冷冻后使用
5 ．  建议从高处滴落样品，可以使细胞舒展开来，便于观察
6 ．  建议细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察。如果放进 4C冰箱里待测，不要超过 3 天
7 ．  本公司提供系列细胞凋亡和衰老检测试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                                                        规格
G&VS10034. 1    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒      10 次
G&VS10034. 1A    标记液(Reagent A)                                     5 毫升
G&VS10034. 1B    清理液(Reagent B)                                       500 毫升
G&VS10034. 1C    固着液(Reagent C)                                       500 毫升
G&VS10034. 1D    封阻液(Reagent D)                                     50 毫升
G&VS10034. 1E    抗体液(Reagent E)                                      10 毫升
G&VS10034. 1F    染色液(Reagent F)                                      10 毫升
G&VS10034. 1G    复染液(Reagent G)                                     10 毫升
G&VS10034. 1H    抗淬灭液(Reagent H)                                       10 毫升

产品编号            名称                    规格
G&VS10021. 1    通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒            100 次
G&VS10021.2    细胞周期蓝色荧光流式细胞分析试剂盒(紫外波长，无需固定和透膜处理)    100 次
G&VS10021.3    细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE) 红色荧光流式细胞分析试剂盒    100 次
G&VS10033    BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034. 1    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.2    BrdU 标记法组织冰冻切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.3    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.4    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.5    BrdU 标记法组织冰冻切片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.6    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10012. 1    细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    100/250 次
G&VS10012.2    全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10 次
G&VS10012.3    冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    50 次
G&VS10012.4    通用型组织/细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10/100 次
G&VS30072    P16 蛋白表达西方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS30073    P21 蛋白表达西方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS20104    P16 基因表达北方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS20105    P21 基因表达北方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS20106. 1    端粒酶活性 TRAP 电泳分析试剂盒    10 次
G&VS20106.2    端粒酶活性 TRAP 实时定量检测试剂盒    20 次
G&VS20107    人体 hTERT 表达实时定量检测试剂盒    20 次
G&VS20024.23    人体 hTERT 基因甲基化检测试剂盒    20 次
G&VS10037. 1    动物细胞 β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10037.2    动物细胞 β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次