BrdU标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
BrdU标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂是一种旨在使用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）替代脱氧胸腺嘧啶核苷（Thymidine）整合到合成的DNA链中，再运用抗BrdU单克隆抗体以及荧光染料缀合物二抗，即通过荧光法定量评价DNA合成和细胞繁殖水平的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞（动物、人体、植物等）的DNA合成和细胞增殖分析。广泛用于细胞繁殖，包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景
溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxyuridine；BrdU）是DNA前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺入DNA合成期（S期）细胞单链DNA核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性BrdU存在，应用BrdU与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动力学问题。自82年Gratzer制备出抗BrdU单抗及标记检测技术后，应用BrdU标记的敏感性已与氘胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）相似，而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫荧光方法定量或定性检测其标记，反映细胞繁殖、细胞周期和DNA合成以及含量等。  

产品内容
标记液（Reagent A）        微升
清理液（Reagent B）        毫升
固着液（Reagent C）        毫升
封阻液（Reagent D）    毫升
抗体液（Reagent E）        微升    
荧光液（Reagent F）        微升
产品说明书        1份

保存方式
保存标记液（Reagent A）、固着液（Reagent C）、封阻液（Reagent D）、抗体液（Reagent E）和荧光液（Reagent F）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；抗体液（Reagent E）和荧光液（Reagent F）严禁反复冻融；标记液（Reagent A）和荧光液（Reagent F）避免光照；有效保证6月

用户自备
黑色96孔细胞培养板：用于细胞培养的容器
培养箱：用于细胞染色孵育
荧光酶标仪：用于荧光分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1．准备1个96孔细胞培养板
2．接种待测细胞（2 X 104细胞）
3．小心抽去细胞培养液
4．加入200微升新鲜的用户自备的完全细胞培养液
5．加入xx微升标记液（Reagent A），避免光照
6．轻轻摇动培养板，混匀
7．放进37℃细胞培养箱孵育90分钟，避免光照
8．小心抽去含有标记液（Reagent A）的细胞培养液
9．加入xx微升清理液（Reagent B），铺满培养表面
10．小心抽去清理液（Reagent B）
11．重复实验步骤9至10一次
12．加入xx微升－20℃预冷的固着液（Reagent C）
13．置于－20℃冰箱里孵育20分钟
14．小心抽去固着液（Reagent C）
15．空气中晾干
16．加入xx微升清理液（Reagent B）
17．室温下孵育2分钟
18．小心抽去清理液（Reagent B）
19．加入xx微升封阻液（Reagent D）
20．置于37℃培养箱里孵育30分钟
21．小心抽去封阻液（Reagent D）
22．加入xx微升抗体液（Reagent E）
23．置于37℃培养箱里孵育30分钟
24．小心抽去抗体液（Reagent E）
25．加入xx微升清理液（Reagent B）
26．置于37℃培养箱里孵育5分钟
27．小心抽去清理液（Reagent B）
28．重复实验步25至27一次
29．加入xx微升荧光液（Reagent F）
30．置于37℃培养箱里孵育30分钟，避免光照
31．小心抽去荧光液（Reagent F）
32．加入xx微升清理液（Reagent B）
33．置于37℃培养箱里孵育5分钟
34．小心抽去清理液（Reagent B）
35．重复实验步32至34二次
36．小心加入xx微升的清理液（Reagent B）
37．即刻放进荧光酶标仪测读：激发波长480nm，激散发波长530nm
38．构建细胞增殖曲线：纵座标（Y轴）为荧光读数值（RFU）；横坐标（X轴）为细胞数、时间点或药物处理浓度等
 
注意事项
1．本产品为10次操作量
2．操作时，须戴手套
3．细胞培养操作时，须严格无菌，以防污染
4．孵育时，须避免光照
5．建议细胞染色完成后，即刻进行荧光分析
6．本公司提供系列BRDU标记检测试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                规格        
G&VS10033.3    BrdU标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂盒        10次
G&VS10033.3A     标记液（Reagent A）                微升
G&VS10033.3B     清理液（Reagent B）                毫升
G&VS10033.3C     固着液（Reagent C）                毫升
G&VS10033.3D     封阻液（Reagent D）            毫升
G&VS10033.3E     抗体液（Reagent E）                毫升
G&VS10033.3F     荧光液（Reagent F）                毫升

试剂盒订购信息
产品编号            名称                规格
G&VS10033.1    BrdU标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒        10/20次
G&VS10033.3    BrdU标记法细胞繁殖比色法定量检测试剂盒        10 次
G&VS10033.3    BrdU标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂盒        10 次
G&VS10034.1    BrdU标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.2    BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.3    BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.4    BrdU标记法载玻片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.5    BrdU标记法组织冰冻切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒    10/20次
G&VS10034.6    BrdU标记法组织石蜡切片细胞繁殖NBT显色检测试剂盒    10/20次