CAT#:JW-26-051
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌Origami2(DE3)化学感受态细胞

产品及特点
本产品是采用大肠杆菌Origami2(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。Origami2(DE3)是K-12的衍生菌株，含有突变的硫氧还蛋白还原酶和谷胱甘肽还原酶基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于含有二硫键蛋白的正确折叠，增强蛋白的可溶性。Origami2(DE3)菌株染色体整合了噬菌体DE3区，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10E6转化子/μg质粒左右。
本产品的基因型是：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F′[lac+ lacIq pro] (DE3) gor522::Tn10 trxB (StrR, TetR)
本产品具有下列特点：
1.在液体培养时可耐受更高的菌体浓度。
2.可作为蛋白表达的宿主菌株使用。
3.用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。
4.可用于具有卡那霉素抗性质粒的蛋白表达。
5.菌株具有氯霉素抗性，四环素抗性，不具有卡那霉素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。
6.本产品足够10次100 μL的转化实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用十二孔盒包装
成分                                                                编号    规格                        包装
大肠杆菌Origami2(DE3)化学感受态细胞    26-051    100 μL×10    1.5 mL 压盖管
使用手册                                                   26-051sc    1 份                        无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期6个月，避免反复冻融。

自备试剂
目的DNA、2YT或LB培养基（不含抗生素）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1 ng，如果是连接反应液，可以加1-3 μL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击45-60秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1mL 无菌的2YT或LB液体培养基（不含抗生素）混匀。
7.37℃摇床200 rpm 振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100μL涂盘到含有跟质粒抗菌素基因对应的抗生素的SOC或LB固体培养皿上。剩下的900μL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800μL上清（培养基），用剩下的100μL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16 小时。

自备试剂
即用型LB培养基（含各种抗生素）