CAT#:JW-26-068
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌W3110化学感受态细胞

产品及特点
本产品是采用大肠杆菌W3110(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，基因组与MG1655菌株高度相似（与MG1655基因组相比，有8个位点的基因突变）。W3110(DE3)是K-12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型”的菌株。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10E7转化子/μg质粒左右。
本产品的基因型是：F- λ- rph-1 INV(rrnD，rrnE)(DE3)
本产品具有下列特点：
1.在液体培养时可耐受更高的菌体浓度。
2.可作为蛋白表达的宿主菌株使用。
3.蛋白产量明显高于其他原核表达菌株。
4.菌株具有氯霉素抗性。
5.本产品足够10次100 μL的转化实验。
6.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用十二孔盒包装
成分        编号        规格        包装
大肠杆菌W3110
化学感受态细胞    26-068        100 μL×10    1.5 mL 压盖管
使用手册        26-068sc        1 份        无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期6个月，避免反复冻融。

自备试剂
2YT或LB培养基（不含抗生素）

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加待转化的DNA溶液（质粒DNA或连接反应液），如果是纯化好的质粒DNA，可以加1 ng，如果是连接反应液，可以加1-3 μL。
3.用移液器轻轻吹打混匀后冰浴30分钟。
4.42℃热击45-60秒。此步对转化非常重要，时间长短也需要准确。
5.迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
6.每个离心管中加入1mL 无菌的2YT或LB液体培养基（不含抗生素）混匀。
7.37℃摇床200 rpm 振荡培养60分钟使抗菌素基因表达。
8.取100μL涂盘到含有跟质粒抗菌素基因对应的抗生素的SOC或LB固体培养皿上。剩下的900μL菌液可以放4℃，等转化结果出来后再处理。如果转化菌落数过少，可以将剩下的菌液离心弃800μL上清（培养基），用剩下的100μL培养基重悬细菌后再涂盘。
9.将平板平放于37℃直至液体被吸收（一般需要10分钟）。
10.倒置培养，37℃培养12-16 小时。

自备试剂
即用型LB培养基（含各种抗生素）