CAT#:JW-27-CAS2437-29-8
低温运输，4℃保存     

孔雀绿磷酸盐检测试剂盒

产品及特点
本产品为孔雀绿磷酸盐检测试剂盒，是一种快速、便捷、高灵敏地测定溶液中可溶性自由无机磷酸根的试剂盒。本试剂盒可用于溶液中磷酸盐浓度的测定、ATP酶(ATPase)活性检测等。它具有下列特点：
1.本试剂盒的检测原理是孔雀绿、钼酸盐和游离的无机正磷酸盐形成绿色磷钼酸复合物，而这种绿色磷钼酸复合物在620-640nm处的吸光度与溶液中游离的无机磷酸盐浓度成正比。本试剂盒的检测原理参考下图：

2.本试剂盒提供了一种高灵敏度定量检测无机游离磷酸盐的可靠方法，但本试剂盒只适合于直接测定溶液中的自由磷酸根，对于脂和蛋白所结合的磷酸根必须在测定之前采用一定的方法进行释放才可以检测。
3.本试剂盒可以运用于96孔板、384孔板或比色皿中进行分析测定或高通量筛选。
4.本试剂盒操作简单、检测速度快，仅需约30min即可完成无机磷酸盐的测定。
5.本试剂盒检测灵敏度高、线性范围广，在0.1-10nmol范围内有良好的检测灵敏度和线性关系。标准品在0-10nmol和0-2nmol范围内的检测效果请参考下图。

6.本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品使用小扁盒包装
成分            编号        规格    包装
孔雀绿磷酸盐检测试剂A    27-CAS2437-29-8a    24 mL    30 mL棕塑瓶
孔雀绿磷酸盐检测试剂B    27-CAS2437-29-8b    12 mL    15 mL本色瓶
磷酸盐标准品，5mM        27-CAS2437-29-8c    0.4 mL    0.5 mL本色管
使用手册            27-CAS2437-29-8sc    1份    无
注意：孔雀绿磷酸盐检测试剂B须在95ºC加热至完全溶解并混匀后使用，其余两种试剂常规解冻并混匀后即可使用。

运输及保存
低温运输，4℃保存，保存期限为1年。

自备试剂
根据所做实验准备相应试剂及耗材。

使用方法    
一、磷酸盐标准品的制备。
1.将5mM磷酸盐标准液配制成50μM磷酸盐工作液。例如取10µL的5mM磷酸盐标准液，加入990µL标准品稀释液，即得1mL 50μM
2.磷酸盐工作液。标准品稀释液优先推荐使用去离子水或双蒸水。稀释后的工作液可在4ºC至少稳定一天。若使用自行准备的试剂稀释标准品，需确保该试剂没有磷酸盐污染。
二、显色剂的配制。
3.根据样本的数量，计算需要配制显色剂的体积。孔雀绿磷酸盐检测试剂A和孔雀绿磷酸盐检测试剂B的使用比例为2:1。例如，20mL孔雀绿磷酸盐检测试剂A和10mL孔雀绿磷酸盐检测试剂B混合即可获得30mL显色剂。该显色剂在4ºC避光保存，可稳定一天。
三、标准曲线的设置。
4.按照下表配制0、1、2.5、5、10、20、30、40、50μM磷酸盐标准品。
管号    50µM 磷酸盐体积(µL)     H2O(µL)    磷酸盐浓度(μM)    磷酸盐浓度(nmol/200µL)
1              0                                 200                          0                           0
2              4                                196                          1                            0.2
3             10                               190                          2.5                          0.5
4              20                               180                          5                           1
5              40                               160                          10                          2
6              80                               120                          20                          4
7              120                               80                          30                          6
8              160                              40                           40                          8
9              200                               0                            50                          10

四、磷酸盐浓度的检测。
5.加入适量体积的待测样品到1.5mL离心管中，若样品体积不足200µL，则用标准品稀释液补齐至200µL，记录样品此时的稀释倍数。
6.从每管中依次吸取200µL不同浓度的磷酸盐标准品和待测样品加到96孔板的样品孔中。
7.各孔加入70µL显色剂，使用多孔板混匀设备混匀或使用移液器轻轻吹打混匀，室温静置30min。
8.用酶标仪测定630nm的吸光度。
9.根据标准曲线和待测样品的稀释倍数计算出样品的磷酸盐浓度。

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