BrdU 标记法细胞繁殖比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途
BrdU 标记法细胞繁殖比色法定量检测试剂是一种旨在使用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU) 替代脱氧 胸腺嘧啶核苷(Thymidine) 整合到合成的 DNA 链中，再运用抗 BrdU 单克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀 合物二抗，通过染料四甲基联苯胺染色显示蓝色，即通过比色法定量评价 DNA  合成和细胞繁殖水平的权 威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种活体细胞(动 物、人体、植物等) 的 DNA 合成和细胞增殖分析。广泛用于细胞繁殖， 包括细胞衰老、细胞凋亡的研究。 产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景
溴脱氧尿嘧啶核苷(5－bromo－2－deoxyuridine；BrdU)是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺 入 DNA 合成期(S 期)细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性 BrdU 存在， 应用 BrdU  与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动 力学问题。自 82 年 Gratzer 制备出抗 BrdU 单抗及标记检测技术后， 应用BrdU 标记的敏感性已与氘胸腺嘧 啶核苷(3H-TdR) 相似， 而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检 测其标记， 反映细胞繁殖、细胞周 期和 DNA  合成以及含量等。四甲基联苯胺(3,3 ’,5,5 ’ -tetramethylbenzidine ，TMB) 是过氧化物酶(Peroxidase) 的生色底物， 在过氧化物酶的催化下， 电子供体 TMB 底物在过氧化氢氧化下失去电子， 产生游离自由阳离子单电子氧化产物， 在 pH4.9 条件下， 呈现出颜 色变化和沉积，形成蓝色沉淀产物，且不受乙醇影响。被用于检测标记过氧化物酶的活性，灵敏度高，特 异性好。

产品内容
标记液(Reagent A)    微升
清理液(Reagent B)    毫升
固着液(Reagent C)    毫升
封阻液(Reagent D)    毫升
抗体液(Reagent E)    微升
二抗液(Reagent F)    微升
染色液(Reagent G)    毫升
产品说明书1 份

保存方式
保存 标记液(Reagent A)、固着液(Reagent C)、封阻液(Reagent D)、抗体液(Reagent E)、二抗液(Reagent F)和 染色液(Reagent G) 在－20℃冰箱里， 其余的保存在 4℃冰箱里； 抗体液(Reagent E)和 二抗液(Reagent F) 严禁反复冻融； 标记液(Reagent A)和 染色液(Reagent G)避免光照；有效保证 6 月

用户自备
96 孔细胞培养板：用于细胞培养的容器
培养箱：用于细胞染色孵育
酶标仪：用于比色分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
1 ．  准备 1 个 96 孔细胞培养板
2 ．  接种待测细胞(2 X 104细胞)
3 ．  小心抽去细胞培养液
4 ．  加入 200 微升新鲜的用户自备的完全细胞培养液
5 ．  加入XX微升 标记液(Reagent A)，避免光照
6 ．  轻轻摇动培养板，混匀
7 ．  放进 37℃细胞培养箱孵育 90 分钟，避免光照
8 ．  小心抽去含有 标记液(Reagent A) 的细胞培养液
9 ．  加入XX微升 清理液(Reagent B)，铺满培养表面
10．小心抽去 清理液(Reagent B)
11．重复实验步骤 9 至 10 一次
12．加入XX微升－20℃预冷的 固着液(Reagent C)
13．置于－20℃冰箱里孵育 20 分钟
14．小心抽去 固着液(Reagent C)
15．空气中晾干
16．加入XX微升 清理液(Reagent B)
17．室温下孵育 2 分钟
18．小心抽去 清理液(Reagent B)
19．加入XX微升 封阻液(Reagent D)
20．置于 37℃培养箱里孵育 30 分钟
21．小心抽去 封阻液(Reagent D)
22．加入XX微升 抗体液(Reagent E)
23．置于 37℃培养箱里孵育 30 分钟
24．小心抽去 抗体液(Reagent E)
25．加入XX微升 清理液(Reagent B)
26．置于 37℃培养箱里孵育 5 分钟
27．小心抽去 清理液(Reagent B)
28．重复实验步 25 至 27 一次
29．加入XX微升 二抗液(Reagent F)
30．置于 37℃培养箱里孵育 30 分钟，避免光照
31．小心抽去 二抗液(Reagent F)
32．加入XX微升 清理液(Reagent B)
33．置于 37℃培养箱里孵育 5 分钟
34．小心抽去 清理液(Reagent B)
35．重复实验步 32 至 34 二次
36．小心加入XX微升的 染色液(Reagent G)
37．室温下孵育 30 分钟，避免光照(注意： 可见蓝色沉淀)
38．即刻放进酶标仪测读：波长 650nm
39．构建细胞增殖曲线：纵座标(Y 轴)为吸光值(OD)；横坐标(X 轴)为细胞数、时间点或药物处理 浓度等

注意事项
1．  本产品为 10 次操作量
2．  操作时，须戴手套
3．  细胞培养操作时，须严格无菌，以防污染
4．  孵育时，须避免光照
5．  染色时间可以根据情况调整，以免造成过度染色或背景过深
6．  如果染色过快或过深，建议稀释一抗和二抗浓度
7．  如果用户没有 650nm 的滤波器，可以使用 630 至 650 之间的任一波长
8 ．  建议细胞染色完成后，即刻进行比色分析
9 ．  本公司提供系列 BRDU 标记检测试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定检测敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号        名称                    规格
G&VS10033.2    BrdU 标记法细胞繁殖比色法定量检测试剂盒        10 次
G&VS10033.2A    标记液(Reagent A)                100 微升
G&VS10033.2B    清理液(Reagent B)                100 毫升
G&VS10033.2C    固着液(Reagent C)                50 毫升
G&VS10033.2D    封阻液(Reagent D)                10 毫升
G&VS10033.2E    抗体液(Reagent E)                5 毫升
G&VS10033.2F    二抗液(Reagent F)                5 毫升
G&VS10033.2G    染色液(Reagent G)                10 毫升
产品编号        名称                    规格
G&VS10033. 1    BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒        10/20 次
G&VS10033.2    BrdU 标记法细胞繁殖比色法定量检测试剂盒        10 次
G&VS10033.3    BrdU 标记法细胞繁殖荧光定量检测试剂盒        10 次
G&VS10034. 1    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.2    BrdU 标记法组织冰冻切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.3    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.4    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.5    BrdU 标记法组织冰冻切片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.6    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次