EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂盒产品说明书

主要用途
 EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂是一种旨在使用高滴度EB病毒感染新鲜的B淋巴细胞，产生永久繁殖的类淋巴母细胞细胞系（lymphoblastoid cell line）的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种正常和疾病人体、动物淋巴细胞永生化的制备。其制备效率高，活力保证。产品即到即用，严格无菌，性能稳定。

技术背景
爱泼斯坦巴尔病毒（Epstein-Barr virus；EBV），又称为人类疱疹病毒4（human herpesvirus 4），是Anthony Epstein和Yvonne Barr于1964年首次成功地将丹尼斯伯基特（Danis Burkitt）发现的非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒而命名的。其中，人体Hawley EB病毒株作为转化型病毒，广泛用于体外转化静息B淋巴细胞，在细胞毒性T细胞抑制剂的帮助下，通过CD21（CR2）受体进入B细胞，产生永生化类淋巴母细胞系（immortalized lymphoblastoid cellline），不断繁殖，从而提供免疫、分子和功能研究的生物源材料，以及基因组DNA的原始材料，同时长期保存各种疾病相关性细胞库；用于研究EB病毒本身的潜伏性和肿瘤生成机制；用于制备单克隆抗体和MHC蛋白抗原等。

产品内容
培养液（Reagent A）        毫升
抑制液（Reagent B）        微升
转化液（Reagent C）        微升
产品说明书        1份

保存方式
保存培养液（Reagent A）在4℃冰箱里，抑制液（Reagent B）在－20℃冰箱里，转化液（Reagent C）在-70℃冰箱里，避免反复冻融，注意生物安全；有效保证3月

用户自备
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
25和75cm2细胞培养瓶：用于细胞培养的容器
二氧化碳细胞培养箱：用于细胞培养
4℃台式离心机：用于样品操作
光学显微镜：用于观察细胞形态

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于冰槽里冻融，同时将培养液（Reagent A）置于37℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。
1．准备好新鲜分离（2小时内）的5毫升淋巴细胞悬液（2 X 106细胞/毫升）
2．转移到15毫升锥形离心管
3．放进台式离心机离心10分钟，速度为600g
4．小心抽去上清液
5．加入xx毫升预热的培养液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
6．转移到25cm2细胞培养瓶里
7．加入xx微升抑制液（Reagent B），充分混匀
8．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育60分钟
9．快速冻融xx管转化液（Reagent C）
10．加入xx微升转化液（Reagent C）到细胞培养瓶里，充分混匀
11．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育1至2周（注意：可见培养液变成桔黄色，细胞成小团聚集；务必不要等到溶液颜色为纯黄色）
12．加入xx毫升新鲜的培养液（Reagent A），混匀
13．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育3天
14．小心移去5毫升陈旧培养液
15．加入xx毫升新鲜的培养液（Reagent A），混匀
16．竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育3天（注意：溶液颜色为桔红色，换液为佳，务必不要等到溶液颜色为纯黄色）
17．每隔3天重复实验步骤14至16一次，持续3周（注意：可见细胞成较大团聚集，且细胞总量达5 X 106）
18．转移到50毫升75cm2培养瓶里继续培养或分装成1 X 106 细胞/毫升/管冻存
19．（选择步骤）传代培养：1 X 105/毫升
20．光学显微镜观察：5周后成团细胞形态（10 X）

注意事项
1．本产品为10次操作
2．所有操作均须在无菌状态下进行
3．操作时，须戴手套和防护口罩
4．操作时，注意生物安全；培养废液专门收集和消毒处理
5．转化液（Reagent C）具有有害性，切忌用手接触，做好防护
6．通常2至3周时间可以制备永生化细胞
7．分离的淋巴细胞活力检测建议使用细胞活力台盼蓝染色试剂盒－G&VS10009
8．本公司提供系列永生化细胞制备产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定制备的细胞维持正常活性

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                规格        
G&VS10031.1     EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂盒        10次
G&VS10031.1A    培养液（Reagent A）                毫升
G&VS10031.1B    抑制液（Reagent B）                毫升
G&VS10031.1C    转化液（Reagent C）                微升
 
试剂盒订购信息
产品编号            名称                规格
G&VS10031.1    EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂盒        10次
G&VS10031.2    EB病毒介导永生化淋巴细胞系微量全血制备试剂盒    10次
G&VS10031.3    EB病毒介导永生化HPRT（—）淋巴细胞系克隆试剂盒    10次
G&VS10038.1    血白细胞分离试剂盒                10次
G&VS10038.2    单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒            10次
G&VS10038.4    动物单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒        10次
G&VS12137.1    淋巴细胞完全培养液                500毫升
G&VS12137.2    淋巴细胞增长培养液                500毫升
G&VS12137.3    淋巴细胞基础培养液                500毫升