CAT#:JW-26-011-10
干冰运输、-80℃保存

大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞

产品及特点
本产品是衍生自大肠杆菌HB101菌株，经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达10E8 cfu/μg。-80℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。质量稳定，使用方便，质优价廉。
本产品的基因型是：F–mcrB mrr hsdS20(rB–, mB–) recA13 supE44 ara- 14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ–leu mtl- 1 endA1+
本产品具有下列特点：
1.适用于克隆不稳定载体片段，含有同向重复序列的慢病毒DNA 和其他反转录病毒载体。
2.此菌株具有链霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。
3.对慢病毒载体等较大的质粒转化的效果好，能够有效抑制长片段末端重复区的重组，减低错误重组的可能性。
4.非常稳定，能提高慢病毒载体或其他不稳定载体的克隆效率。
1.本产品足够10次100 uL的转化实验。
5.本产品只能用于科研。
规格及成分
本产品采用10孔盒包装
成分                                                编号                规格        包装
大肠杆菌Stbl3化学感受态细胞    26-011    100 μL×10    1.5 mL压盖管
使用手册                                    26-011sc    1 份                   无

运输及保存
干冰运输、-80℃保存，有效期半年。避免反复冻融。

自备试剂
目的 DNA、SOC 或 LB 培养基等

使用方法
1.取感受态细胞置于冰浴中(或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中)。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50 μL感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，质粒或连接产物)，用手拨打EP管底或用移液器轻轻吹打混匀，冰上静置25分钟。
3.42℃水浴热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟，晃动会降低转化效率。
4.每个离心管中加入450 μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)。
5.30℃，225 rpm复苏90分钟。(当质粒中含有不稳定片段时，30℃培养可降低错误重组的概率，若转化control PUC19计算转化效率，则需37℃，225 rpm复苏60分钟。)
6.5000 rpm离心1分钟收菌，留取100 μL左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的SOC或LB培养基上。
7.平板倒置放于30℃培养箱过夜培养。(若转化control PUC19计算转化效率，则需37℃培养过夜)
注意事项
1.涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μL转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(5,000 rpm，1分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2.新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于30℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3.涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。