石蜡切片TUNEL荧光测定试剂盒产品说明书

主要用途
石蜡切片TUNEL荧光测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法，包括石蜡分离、无热性酶消解等完整步骤，从存档中的石蜡包埋的组织切片中探寻DNA断点，即运用修饰过的核苷酸，在末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）的帮助下，对DNA单链或双链上断点处的3’末端进行荧光素标记，原位探测和定量分析单细胞水平的DNA降解状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的DNA降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景
细胞凋亡，或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物学过程中，起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的激活，将DNA链在核小体间连接区切成缺口，使核内DNA断裂成小片断。在组织细胞原位DNA切口处可被末端脱氧核糖核酸转移酶（TdT）标记上生物素dUTP，即TUNEL（Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling），然后通过与荧光素缀合卵白素（FITC conjugated avidin）的反应，显示绿色荧光（激发波长488nm， 散发波长530nm）。

产品内容
去石蜡液（Reagent A）    毫升
补水液A（Reagent B）    毫升
补水液B（Reagent C）    毫升
补水液C（Reagent D）    毫升
补水液D（Reagent E）    毫升
清理液（Reagent F）        毫升
酶解液（Reagent G）    微升
终止液（Reagent H）    微升
酶标液（Reagent I）        微升
荧光液（Reagent J）        微升    
产品说明书        1份

保存方式
保存酶解液（Reagent G）、酶标液（Reagent I）和荧光液（Reagent J）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在4℃冰箱里；荧光液（Reagent J），避免光照；有效保证6月

用户自备
小型染色缸：用于石蜡切片的去石蜡和染色操作
（共聚焦）荧光显微镜：用于细胞染色后观察分析

特别注意
1．酶标液（Reagent G）不能在室温下冻融，而必须在冰槽里冻融，冻融后即刻使用；严禁反复冻融；考虑分装，以备下次使用
2．荧光液（Reagent E）避免光照
3．每次移取试剂，须更换枪头，以免污染母液，影响结果
4．石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则组织易脱落

实验步骤
一、去石蜡处理
1．取出10片待测的石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
2．放进80℃烘箱，孵育30分钟
3．室温下静置15分钟
4．按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸             孵育时间
xx毫升去石蜡液（Reagent A）     15分钟
xx毫升去石蜡液（Reagent A）    15分钟
xx毫升去石蜡液（Reagent A）    15分钟
xx毫升补水液A（Reagent B）    3分钟
xx毫升补水液B（Reagent C）    3分钟
xx毫升补水液C（Reagent D）    3分钟
xx毫升补水液D（Reagent E）     3分钟
5．小心移去切片上的补水液D（Reagent E）
6．小心加上xx微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
7．室温下孵育5分钟
8．小心移去切片上的清理液（Reagent F）

二、蛋白消解处理
1．小心加上xx微升酶解液（Reagent G），铺满整个切片样品表面
2．室温下孵育15分钟
3．小心移去切片上的酶解液（Reagent G）
4．小心加上xx微升终止液（Reagent H），铺满整个切片样品表面
5．室温下孵育5分钟
6．小心移去切片上的终止液（Reagent H）
7．室温下，将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育5分钟
8．小心移去切片上的清理液（Reagent F）

三、断点标记处理
1．小心加上xx微升含有酶标液（Reagent I），铺满整个切片样品表面
2．在37℃湿润的培养箱里，孵育1小时，保持湿润，避免干燥
3．小心移去切片上的酶标液（Reagent I）
4．室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分钟
5．小心移去切片上的清理液（Reagent F）

四、样本染色处理
1．小心加上xx微升荧光液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面
2．室温下孵育30分钟，避免光照
3．小心移去切片上的荧光液（Reagent J）
4．室温下，小心将切片置入xx毫升清理液（Reagent F）中孵育2分钟
5．小心移去切片上的清理液（Reagent F）
6．放上盖玻片或封片
7．即刻在（共聚焦）荧光（激发波长488nm， 散发波长530nm）观察：阳性细胞呈现绿色荧光

注意事项
1．本产品为10次操作
2．操作时，须戴手套，以防污染
3．石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛或常规固定液4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
4．酶标液（Reagent I）温度敏感，严禁反复冻融
5．清理液（Reagent F）50毫升置于小型染色缸里，可重复使用
6．所有操作在室温下进行，除酶标孵育外
7．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
8．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
9．细胞荧光染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察
10．本公司提供系列细胞凋亡试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                规格        
G&VS10022.6    石蜡切片TUNEL荧光测定试剂盒            10/20次
G&VS10022.6A     去石蜡液（Reagent A）            毫升
G&VS10022.6B     补水液A（Reagent B）            毫升
G&VS10022.6C     补水液B（Reagent C）            毫升
G&VS10022.6D     补水液C（Reagent D）            毫升
G&VS10022.6E     补水液D（Reagent E）            毫升
G&VS10022.6F     清理液（Reagent F）                毫升
G&VS10022.6G     酶解液（Reagent G）            毫升
G&VS10022.6H     终止液（Reagent H）            毫升
G&VS10022.6I     酶标液（Reagent I）                毫升
G&VS10022.6J     荧光液（Reagent J）                毫升

试剂盒订购信息

产品编号            名称                规格
G&VS10022.1    细胞TUNEL显色法（DAB）测定试剂盒        10/20次
G&VS10022.2    冰冻切片TUNEL显色法（DAB）测定试剂盒        10次
G&VS10022.6    石蜡切片TUNEL显色法（DAB）测定试剂盒        10次
G&VS10022.4    细胞TUNEL荧光法（Fluorescein）测定试剂盒    10次
G&VS10022.5    冰冻切片TUNEL荧光法（Fluorescein）测定试剂盒    10次
G&VS10022.6    石蜡切片TUNEL荧光法（Fluorescein）测定试剂盒    10次
G&VS10022.7    细胞TUNEL比色法定量检测试剂盒        10/50次