吖啶橙（acridine orange）细胞凋亡染色试剂盒产品说明书

主要用途
吖啶橙（acridine orange）细胞凋亡染色试剂是一种旨在通过荧光染料吖啶橙（Acridine Orange）与DNA特异性结合，呈现绿色，用于分析和观察细胞核形态或DNA含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞核（动物、人体、植物、昆虫等）的观察。可以被用于细胞周期、细胞凋亡、细胞流式仪分析等研究。产品严格无菌，即到即用，荧光清晰，操作简捷，性能稳定。

技术背景
吖啶橙（Acridine Orange），分子式为C17H20CIN3，分子量为301.82，是核酸特异性染料，为膜通透性，活细胞和死细胞均能染色。通过嵌入（intercalation）或静电吸引（electrostatic attraction），与双链DNA形成复合物，即1个分子结合3个碱基，而呈现绿色荧光（激发波长502nm散发波长525nm）；或与单链DNA或RNA结合，即1个分子结合1个磷酸基团，而呈现桔红色荧光（激发波长460nm，散发波长650nm）。 在荧光显微镜下，活细胞核呈弥散均匀荧光，出现细胞凋亡时，细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
染色液（Reagent B）        微升
产品说明书        1份

保存方式
保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，用铝箔封裹，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于中和胰蛋白酶的处理
15毫升锥形离心管：用于细胞收集的容器
1.5毫升离心管：用于细胞染色的容器
微型台式离心机：用于细胞收集的操作
倒置荧光显微镜：用于观察细胞核形态
细胞流式仪：用于细胞荧光分析

实验步骤
一、直接法
1．准备1个细胞培养12孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）
2．小心抽去细胞培养液
3．轻轻沿着孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4．小心抽去xx毫升 清理液（Reagent A）
5．小心加入xx微升清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
6．加入xx微升染色液（Reagent B）
7．室温下孵育60分钟，避免光照（或37℃培养箱里孵育20分钟）
8．小心抽掉染色液
9．轻轻沿着孔壁加入xx微升清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
10．小心抽去清理液（Reagent A）
11．重复实验步骤9至10一次
12．小心加入xx微升清理液（Reagent A），覆盖培养孔表面
13．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长500nm，散发波长530nm（细胞核呈现绿色）
 
二、间接法
1．准备1个细胞培养12孔板的待测细胞，每孔铺满率达70％（约30万细胞数）
2．小心移出细胞培养液到15毫升锥形离心管（收集悬浮细胞）
3．加入xx毫升 清理液（Reagent A）到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4．小心移出xx毫升 清理液（Reagent A）到15毫升锥形离心管（收集洗脱细胞）
5．加入500微升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养孔表面
6．放进37℃培养箱孵育1分种
7．轻轻手击震动培养板，使细胞脱落
8．加入1毫升用户自备的完全细胞培养液
9．移入15毫升锥形离心管
10．放进台式离心机离心5分钟，速度为300g
11．小心抽去上清液
12．加入xx微升清理液（Reagent A）
13．用200微升枪头上下轻柔抽吸，混匀细胞颗粒群
14．转入到1.5毫升离心管或细胞流式仪专用测试管
15．加入xx微升染色液（Reagent B）
16．轻度涡旋震荡2秒
17．室温下孵育60分钟，避免光照（或37℃培养箱里孵育20分钟）
18．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
19．小心抽去上清液
20．加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
21．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为300g（或2000RPM，例如eppendorf 5415）
22．小心抽去上清液
23．重复实验步骤20至22一次
24．加入xx微升清理液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
25．移出5微升到载玻片上，放上盖玻片
26．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长500nm，散发波长530nm（细胞核呈现绿色）
27．或即刻进行细胞流式仪分析：激发波长488nm，观察50000个细胞以上

注意事项
1．本产品为50次（8个12孔细胞培养板）操作
2．所有操作均须无菌状态下进行
3．确保实验准确性，须收集所有悬浮和贴壁细胞；同时要确保足够的细胞数
4．可用35mm培养皿、6孔培养板或25cm2细胞培养瓶操作，相应增加染色液的用量。但12孔培养板为理想选择
5．操作时，须戴手套
6．孵育时，须避免光照
7．建议细胞染色完成后，即刻进行分析；若暂不观察，可保存在4℃冰箱里，但不宜超过1周
8．细胞核呈现多个散在块状结构，为细胞凋亡
9．细胞流式仪分析前，须混匀内容物
10．细胞流式仪分析，细胞检测量不得少于10000个
11．告知流式仪技术员有关细胞类型
12．本公司提供系列细胞核染色分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号        名称                    规格        
G&VS10023.4    吖啶橙（acridine orange）细胞凋亡染色试剂盒    50次        
G&VS10023.4A    清理液（Reagent A）                毫升
G&VS10023.4B     染色液（Reagent B）                毫升
G&VS12024    胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液            毫升
G&VS12052    DMEM完全细胞培养基        毫升    

试剂盒订购信息

产品编号        名称                        规格
G&VS10023.1    通用型细胞核形态染色/细胞凋亡检测试剂盒            100次
G&VS10023.2    PROPIDIUM IODIDE细胞核形态染色/细胞凋亡检测试剂盒    100次
G&VS10023.3    CHROMOMYCIN A3细胞核形态染色/细胞凋亡检测试剂盒    50次
G&VS10023.4    吖啶橙（acridine orange）细胞凋亡染色试剂盒        50次
G&VS10092.1    HOECHST 33342和PROPIDIUM IODIDE细胞膜变检测试剂盒    50次
G&VS10092.2    吖啶橙（acridine orange）和溴化乙锭（ethidine bromide）双染细胞凋亡检测试剂盒    50次
G&VS10092.3     吖啶橙（Acridine Orange）/赫斯特33342（HOECHST33342）双染细胞凋亡检测试剂盒    50次
G&VS10092.4     吖啶橙（Acridine Orange）/碘化丙啶（PROPIDIUM IODIDE）双染细胞凋亡检测试剂盒    50次