大量 Lipofusin  脂质体细胞转染试剂盒

主要用途
大量 Lipofusin 脂质体细胞转染试剂是一种旨在通过特制的阳离子脂质体介导载体，帮助大剂量(5 微克以上) 目标 DNA 轻易通过细胞膜的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成 功实验证明的。其适用于质粒 DNA ，RNA，寡聚核苷酸，酵母人工染色体和蛋白等转入 100 多种类型的 贴壁和悬浮培养细胞系以及植物原生质体。可以被用于稳定转染或暂态转染。产品严格无菌， 即到即用， 无核酶污染，配比优化，操作简捷，性能稳定，转染效率明显。

技术背景
Lipofusin 为阳离子脂质体介导载体，与目标 DNA 的磷酸骨架结合而生成的复合物，在没有干扰因素(无 血清)的环境下，携带外源性 DNA 、RNA 等高效进入细胞内。但 Lipofusin 对细胞具有一定毒性。

产品内容
清理液(Reagent A)       毫升
转染液(Reagent B)       毫升
介导液(Reagent C)       微升
产品说明书                     份

保存方式
保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液 (G&VS12024)：用于细胞脱离
毫升离心管：用于转染液操作的容器

实验步骤
转染实验开始前，将 清理液(Reagent A) 和 转染液(Reagent B) 放进XX℃恒温水槽
预热。然后进行下列操作。
1 ．  准备一个XXcm2细胞培养瓶的细胞(XX细胞)
2 ．  在转染前一天，用胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液脱离细胞一次
3 ．  次日，细胞铺满率达XX至XX％(注意：不要超过  ％)
4 ．  移取 250 微升转染液(Reagent B) 到无菌的XX毫升离心管，标记为 DNA 管
5 ．  加入XX微升用户需转染的 DNA  (XX微克)，用XX微升枪头轻轻上下抽吸混匀
6 ．  再移取XX微升 转染液(Reagent B) 到另一个无菌的XX毫升离心管，标记为介导液管
7 ．  加入XX微升 介导液(Reagent C) 用XX微升枪头轻轻上下抽吸混匀
8 ．  即刻用XX微升枪头移出 DNA 管里的 DNA 混匀物， 一滴一滴加入到介导液管里(注意： 不要上下抽 吸混匀)
9 ．  在室温下静置XX分钟
10．在静置期间，同时小心抽掉细胞培养瓶里的培养液
11．轻轻加入XX毫升XX℃预热的 清理液(Reagent A)，铺满细胞生长表面
12．即刻小心抽掉 清理液(Reagent A)
13．轻轻加入XX毫升XX℃预热的 转染液(Reagent B)，铺满细胞生长表面
14．即刻小心抽掉 转染液(Reagent B)
15．轻轻加入XX毫升XX℃预热的 转染液(Reagent B)
16．用XX 微升枪头轻轻上下抽吸XX次介导液管里的混匀液
17．竖立细胞培养瓶，用XX微升枪头移出介导液管里的混匀液到细胞培养瓶里
18．轻轻摇动培养瓶，充分混匀
19．平放细胞培养瓶，确保铺满细胞生长表面
20．放进 37℃细胞培养箱，孵育XX小时
21．小心抽掉所有介导混匀液
22．如果暂态表达，可以收集细胞后保存或即刻进行后续实验
23．如果稳态表达，小心抽掉培养液
24．加入XX毫升用户自备的完全细胞培养液
25．放进XX ℃细胞培养箱，孵育过夜
26．小心抽掉培养液
27．用胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液脱离细胞
28．平均接种到XX个新的XXcm2细胞培养瓶
29．分别加入 5 毫升用户自备的筛选培养液，直至获得稳态转染的细胞克隆

注意事项
1 ．  本产品为 10 次操作
2 ．  整个操作须无菌操作
3 ．  操作时使用的枪头须使用带滤芯的枪头
4 ．  更换液体时，须小心，以防细胞松动或脱落
5 ．  用于转染的质粒 DNA 建议使用氯化铯纯化
6 ．  转染孵育时间可达 17 小时， 但建议在 10 小时内；如果细胞对介导液敏感，可减少孵育时间到 3 小时
7 ．  如果稳态表达，必要时，可增加转染后细胞恢复培养时间至 72 小时， 然后再进行筛选
8 ．  本产品可以转染各种类型的细胞株
9 ．  本产品提供的成分配比优化
10．本产品适合于 75cm2细胞培养瓶的操作， DNA为 10 微克， GENMED介导液(Reagent C) 为 60 微升
11．如果转染不理想，可以适当增加介导液和 DNA 用量或考虑使用其它转染试剂
12．建议使用操作说明的进行转染。如果转染 24 孔板的单孔， 则试剂使用量是上述操作量的十分之一； 其 它容器可按比例调整试剂用量

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能长期稳定
2 ．  本产品经鉴定转染效率高

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 30 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号                                        名称                                                        规格
G&VS10025                    大量 lipofusin 脂质体细胞转染试剂盒                 10 次
G&VS10026A                  清理液(Reagent A)                                        500 毫升
G&VS10026B                  转染液(Reagent B)                                        500 毫升
G&VS10026C                  介导液(Reagent C)                                         1 毫升
G&VS10026                    小量 lipofusinX 脂质体细胞转染试剂盒               10 次
G&VS10027                    小量 sperfusin 脂质体细胞转染试剂盒                 20 次
G&VS10028                    QuikFusin 非脂质体细胞转染试剂盒                    20 次
G&VS12024                    胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液                    100/500 毫升