石蜡切片TUNEL 测定试剂盒产品说明书

主要用途
石蜡切片 TUNEL 测定试剂是一种旨在使用标准化的化学方法， 包括石蜡分离、无热性酶消解等 完整步骤， 从存档中的石蜡包埋的组织切片中探寻 DNA 断点， 即运用修饰过的核苷酸， 在末端脱氧核糖 核酸转移酶 (TdT) 的帮助下，对 DNA 单链或双链上断点处的3’末端进行标记， 原位探测和定量分析 单细胞水平的 DNA  降解状况的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明 的。主要适用于石蜡包埋组织切片的 DNA  降解测定。广泛用于细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即 用，反应敏感，操作简捷，性能稳定。

技术背景
细胞凋亡， 或细胞程序性死亡，在诸如形态发育、免疫系统调节、以及肿瘤和神经退行性疾病等各种生物 学过程中， 起着实质性的作用。凋亡细胞具有形态、生化、和分子方面的显著特征。其中内源性核酸酶的 激活，将 DNA 链在核小体间连接区切成缺口，使核内DNA 断裂成小片断。在组织细胞原位 DNA 切口处 可被末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT)标记上生物素 dUTP，即 TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling)，然后通过与过氧化物酶缀合卵白素(Peroxidase conjugated avidin) 的反应， 由二氨基联苯胺(diaminobenzidine ，DAB)作用显示为棕色(过氧化物酶活性)。

产品内容    
去石蜡液(Reagent A)        毫升
补水液 A  (Reagent B)    毫升
补水液 B  (Reagent C)    毫升
补水液 C  (Reagent D)    毫升
补水液 D  (Reagent E)    毫升
清理液(Reagent F)        毫升
酶解液(Reagent G)        微升
终止液(Reagent H)        微升
酶标液(Reagent I)        微升
染色液(Reagent J)        微升
显色液 A  (Reagent K)    微升
显色液 B  (Reagent L)        毫升
强化液(Reagent M)        微升
产品说明书        1 份

保存方式    
保存 酶解液(Reagent G)、酶标液(Reagent I)、染色液(Reagent J)和 显色液 A (Reagent K) 在－20℃冰箱里， 严格避免反复冻融， 其余的保存在 4℃冰箱里； 染色液(Reagent J)和 显色液 A  (Reagent K)，避免光照；有效保证 6 月

用户自备
小型染色缸：用于石蜡切片的去石蜡和染色操作
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

特别注意
1 ．  酶标液(Reagent G) 不能在室温下冻融，而必须在冰槽里冻融， 冻融后即刻使用；严禁反 复冻融
2 ．  显色液 A  (Reagent K)和 显色液 B  (Reagent L) 必须在实验操作前即刻混匀； 混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉
3 ．  显色液 A  (Reagent K)如果出现沉淀，须过滤后再用
4 ．  每次移取试剂，须更换枪头，以免污染母液，影响结果
5 ．  石蜡包埋前，组织切片须用   ％多聚甲醛 4℃条件下， 固定   小时，否则组织易脱落
6 ．  每次操作必须做一个阳性对照

实验步骤
在染色前，将     ℃冰箱里的试剂盒中的 显色液 A  (Reagent K) 置入冰槽里融化，然后移取
2  微升 显色液 A (Reagent K) 和 1.8 毫升 显色液 B (Reagent L) 到 2 毫升离心管， 再加入    微升 强化液(Reagent M)，充分混匀，标记为 显色工作液，置于暗室。 然后进行下列操作：

一、     去石蜡处理
1． 取出    片待测的石蜡包埋的组织切片(注意： 石蜡包埋前，组织切片须用1％多聚甲醛4℃条件下， 固定  小时，此步很重要)
2 ．  放进    ℃烘箱，孵育    分钟
3 ．  室温下静置     分钟
4 ．  按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸            孵育时间
50 毫升 去石蜡液(Reagent A)    
50 毫升 去石蜡液(Reagent A)    
50 毫升 去石蜡液(Reagent A)    
50 毫升 补水液 A  (Reagent B)    
50 毫升 补水液 B  (Reagent C)    
50 毫升 补水液 C  (Reagent D)    
50 毫升 补水液 D  (Reagent E)    
5 ．  小心移去切片上的 补水液 D  (Reagent E)
6 ．  小心加上 200 微升 清理液(Reagent F) 在切片上，铺满整个切片样品表面
7 ．  室温下孵育 5 分钟
8 ．  小心移去切片上的 清理液(Reagent F)

二、     蛋白消解处理
9 ．   小心加上XX微升 酶解液(Reagent G)，铺满整个切片样品表面
10．室温下孵育XX分钟
11．小心移去切片上的 酶解液(Reagent G)
12．小心加上XX微升 终止液(Reagent H)，铺满整个切片样品表面
13．室温下孵育XX分钟
14．小心移去切片上的 终止液(Reagent H)
15．室温下，将切片置入XX毫升 清理液(Reagent F) 中孵育    分钟
16．小心移去切片上的 清理液(Reagent F)

三、     断点标记处理
17．小心加上XX微升含有 酶标液(Reagent I)，铺满整个切片样品表面
18．在 37℃湿润的培养箱里，孵育XX小时，保持湿润，避免干燥
19．小心移去切片上的 酶标液(Reagent I)
20．室温下，小心将切片置入XX毫升 清理液(Reagent F) 中孵育     分钟
21．小心移去切片上的 清理液(Reagent F)

四、样本染色处理
22．小心加上XX微升 染色液(Reagent J) 在切片上，铺满整个切片样品表面
23．室温下孵育XX分钟，避免光照
24．小心移去切片上的 染色液(Reagent J)
25．室温下，小心将切片置入     毫升 清理液(Reagent F) 中孵育 2 分钟
26．小心移去切片上的 清理液(Reagent F)
27．小心加上XX微升含有 显色液 A  (Reagent  K) 和 显色液 B  (Reagent  L) 的 显色工作液，铺满整个切片样品表面
28．室温下孵育XX至XX分钟，或直至样本出现棕褐色
29．小心移去切片上含有 显色液A(Reagent K)和 显色液 B(Reagent L)的 显色工作液
30．室温下，小心将切片置入XX毫升 清理液(Reagent F) 中浸泡 5 秒
31．小心移去切片上的 清理液(Reagent F)
32．放上盖玻片或封片
33 ．(选择步骤)进行甲基绿复染(注意： 建议使用甲基绿复染试剂盒－G&VS40010)
34．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色

注意事项
1．  本产品为 10 次操作
2．  本产品为生物素标记，超过荧光素标记强度 1000 倍
3．  本产品无需 POD 转换，直接在光学显微镜下观察，既方便，又确保信号不受影响
4．  在整个操作过程中须带手套，以防污染
5．  石蜡包埋前，组织切片须用 1％多聚甲醛 4℃条件下，固定 16 小时，否则造成样品支离破碎
6．  酶标液(Reagent I) 温度敏感，严禁反复冻融
7．  清理液(Reagent F) 50 毫升置于小型染色缸里，可重复使用
8．  所有操作在室温下进行，除酶标孵育外
9 ．  每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
10．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
11．细胞显色，避免过度，密切目测观察，控制时间
12．细胞显色完成后，即刻进行光学显微镜观察
13．本公司提供系列细胞凋亡试剂产品
14．本公司提供 TUNEL 分析外包服务

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能长期稳定
2 ．  本产品经鉴定显色清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货 后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定， 保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题， 请立即以书面形式(实验报 告)与本公司联系， 并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误 操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息        
编号        名称            规格
G&VS10022.3    石蜡切片 TUNEL 测定试剂盒    10/20 次
G&VS10022.3A    去石蜡液(Reagent A)        500 毫升
G&VS10022.3B    补水液 A(Reagent B)        500 毫升
G&VS10022.3C    补水液 B(Reagent C)        500 毫升
G&VS10022.3D    补水液 C(Reagent D)        500 毫升
G&VS10022.3E    补水液 D(Reagent E)        500 毫升
G&VS10022.3F    清理液(Reagent F)        500 毫升
G&VS10022.3G    酶解液(Reagent G)        5 毫升
G&VS10022.3H    终止液(Reagent H)        10 毫升
G&VS10022.3I    酶标液(Reagent I)        5 毫升
G&VS10022.3J    染色液(Reagent J)        10 毫升
G&VS10022.3K    显色液 A(Reagent K)        10 毫升
G&VS10022.3L    显色液 B(Reagent L)        90 毫升
G&VS10022.3M    强化液(Reagent M)        10 毫升
G&VS10022.1    细胞 TUNEL 测定试剂盒    10/20 次
G&VS10022.2    冰冻切片 TUNEL 测定试剂盒    10/20 次
产品编号        名称                规格
G&VS10016. 1    细胞内活性氧(ROS)高质荧光测定试剂盒    20 次
G&VS10016.2    细胞内活性氧(ROS)初级荧光测定试剂盒    100 次
G&VS10017    线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒    20 次
G&VS10021    细胞周期流式细胞分析试剂盒        100 次
G&VS10022. 1    细胞 TUNEL 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10022.2    冰冻切片 TUNEL 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10022.3    石蜡切片 TUNEL 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10063. 1    细胞 KUNEL 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10063.2    冰冻切片 KUNEL 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10063.3    石蜡切片 KUNEL 测定试剂盒        10/20 次
G&VS10023. 1    HOECHST 33342 细胞核形态染色试剂盒    100 次
G&VS10023.2    PROPIDIUM IODIDE 细胞核形态染色试剂盒    100 次
G&VS10023.3    CHROMOMYCIN A3 细胞核形态染色试剂盒    50 次
G&VS10064    HOECHST 33342 和 PROPIDIUM IODIDE 细胞膜变检测试剂盒    50 次
G&VS10032    TUNEL 流式细胞仪分析试剂盒        10 次
G&VS10042. 1    动物细胞/组织细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒    10 次
G&VS10042.2    植物细胞色素 C 释放凋亡检测试剂盒    10 次
G&VS20013    细胞调亡 DNA 条带检测试剂盒        10 次
G&VS10046    G-B 细胞活力和凋亡检测试剂盒        50 次
G&VS10051    ATP 细胞繁殖与毒性定量检测试剂盒    100 次
G&VS10052    R-G 细胞活力和凋亡检测试剂盒        100 次
G&VS40010    甲基绿复染试剂盒            50 次