活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒产品说明书

主要用途
 活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂是一种旨在通过长波长的荧光染料特异性地聚集在线粒 体，并呈现红色，用于分析和观察线粒体活性与形态以及双重染色或重叠染色定位的权威而经典的技术方 法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体(动物、人体、昆虫等)的 形态观察、活性探测和定位标记。产品严格无菌， 即到即用， 活体检测， 分辨率高， 操作简捷， 性能稳定， 滞留持久。

技术背景
线粒体是细胞中重要的细胞器，其主要功能是提供细胞内各种物质代谢所需要的能量。线粒体大量存在于 代谢旺盛的细胞中， 如动物的心肌，肝，肾等器官和组织的细胞中。大量制备线粒体就是从这些器官组织 中提取，或从组织培养细胞中提取。在光学显微镜下线粒体呈现为颗粒状、棒状或弯曲细线。线粒体荧光 探针 MitoTracker RED，是一种含有硫醇 (Thiol)氯甲基基团的荧光染料，自由通过细胞膜，选择性地 聚集在线粒体。它可以对活细胞进行直接染色， 在 580nm 波长可以清晰看到被染成红色的线状或颗粒小体 的线粒体。并可以分析线粒体膜电位，以检测线粒体活性。

产品内容
清理液(Reagent A)毫升
固着液(Reagent B)毫升
预备液(Reagent C)毫升
染色液(Reagent D)微升
产品说明书1 份

保存方式
保存 染色液(Reagent D)在－20℃冰箱里， 避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月

用户自备
完全细胞培养液：用于染色后培养液更换
24 孔细胞培养板：用于贴壁细胞染色的容器
1.5 毫升离心管：用于细胞染色的容器
微型台式离心机：用于沉淀细胞
培养箱：用于染色孵育
(共聚焦)荧光显微镜：用于细胞荧光分析

实验步骤
实验开始前， 将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液(Reagent D) 置入冰槽里融化， 然后分别移
出    微升 预备液(Reagent  C) 和    微升 染色液(Reagent D) 到新的 1.5 毫升
离心管，标记为 染色工作液，并放在暗室里备用。然后进行下列操作。

一、  贴壁细胞标准染色
1 ．  准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％
(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12)
2 ．  小心抽去细胞培养液
3 ．  小心沿着孔壁加入 500 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4． 小心加入XX微升含有 预备液(Reagent C)和 染色液(Reagent D)的 染色工作液，小心摇动培养板，使其混匀(注意： 参见注意事项9  和10)
5 ．  放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟
6 ．  小心抽去含有 染色工作液的细胞培养液
7 ．  小心沿着孔壁加入 1 毫升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔
8 ．  即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm (线粒体呈现红色)

二、  贴壁细胞快速染色
1．  准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％
(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12)
2．  直接加入XX微升(1：500 容量比)含有 预备液(Reagent C)和 染色液(Reagent
D) 的 染色工作液到 1 毫升培养液里， 小心摇动培养板， 使其混匀(注意： 参见注意事项9 和10)
3．  放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟
4．  小心抽去含有 染色工作液的细胞培养液
5．  小心沿着孔壁加入 1 毫升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔
6．  即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm  (线粒体呈现红色)

三、  悬浮细胞或脱离细胞染色
1 ．  将悬浮细胞或脱离细胞(1 X 106 细胞)移入到 1.5 毫升离心管
2 ．  放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
3 ．  小心抽去上清液
4 ．  加入 500 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液
5 ．  加入XX微升含有 预备液(Reagent C) 和 染色液(Reagent D) 的 染色工作液，充分混匀(注意： 参见注意事项9  和10)
6 ．  放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟
7 ．  放进微型台式离心机离心 1 分钟，速度为 300g  (或 2000RPM，例如 eppendorf 5415)
8 ．  加入 100 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液，混匀
9 ．  移出 5 微升到载玻片上，放上盖玻片
10．(选择步骤)如果需要双重染色，移出 3.5 微升染色细胞到载玻片上
11．(选择步骤)加入 1 微升用户需测的第二染料，放上盖玻片
12．(选择步骤)放进 37℃细胞培养箱里孵育 10 分钟
13．即刻在(共聚焦)荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm  (线粒体呈现红色)

四、细胞双重染色
1．  准备 1 个载玻片培养皿的待测细胞
2．  小心抽去细胞培养液
3．  小心加入 1 毫升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液
4．  小心加入XX微升含有 预备液(Reagent C)和 染色液(Reagent D)的 染色工作液，小心摇动培养皿，使其混匀(注意： 参见注意事项9  和10)
5．  放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟
6．  小心抽去含有 染色工作液的细胞培养液
7．  小心加入XX微升 37℃预热的清理液(Reagent A)
8．  小心抽去 清理液(Reagent A)
9．   (注意： 由此步骤开始， 用户可以进行其它膜通透性荧光染料的标记;如果是膜不通透性荧光染料， 继 续下列操作)
10．小心加入XX微升 37℃预热的清理液(Reagent A)
11．小心加入XX微升 固着液(Reagent B)，小心摇动培养皿，使其混匀
12．放进 37℃细胞培养箱里孵育 15 分钟
13．小心抽去含有 固着液(Reagent B) 的 清理液(Reagent A)
14．小心加入XX毫升 37℃预热的清理液(Reagent A)
15．小心抽去 清理液(Reagent A)
(注意： 由此步骤开始，用户可以进行抗体荧光染色或膜不通透性荧光染料的通透和标记)
16．在荧光显微镜下进行观察

四、  细胞固定染色
1．准备 1 个细胞培养 24 孔板的待测细胞，细胞铺满率达70％
(注意： 可以使用载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和其它培养孔板，见注意事项12)
2 ．  小心抽去细胞培养液
3 ．  小心沿着孔壁加入 500 微升 37℃预热的用户自备的完全细胞培养液到细胞培养孔，覆盖培养孔表面
4 ．  小心加入XX微升 固着液(Reagent B)，小心摇动培养板，使其混匀
5 ．  放进 37℃细胞培养箱里孵育 15 分钟
6 ．  小心抽去含有 固着液(Reagent B) 的细胞培养液
7 ．  小心加入XX微升 清理液(Reagent A)
8 ．  小心抽去 清理液(Reagent A)
9 ．  再加入XX微升 清理液(Reagent A)
10．小心加入 2 微升含有 预备液(Reagent C) 和 染色液(Reagent D) 的 染色工作液，小心摇动培养板，使其混匀(注意： 参见注意事项10)
11．放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟
12．小心抽去含有 染色工作液的清理液(Reagent A)
13．加入XX微升新鲜的 清理液(Reagent A)
14．小心抽去 清理液(Reagent A)
15．再加入XX微升 清理液(Reagent A)
16．即刻在倒置荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm (线粒体呈现红色)

五、  切片染色
1 ．  准备 1 个待测的切片样品
2 ．  小心加上XX微升 清理液(Reagent A)，覆盖切片表面
3 ．  小心移去切片上的 清理液(Reagent A)
4 ．  小心加上XX微升 清理液(Reagent A)，覆盖切片表面
5 ．  小心加入XX微升 固着液(Reagent B)
6 ．  室温下孵育 10 分钟
7 ．  小心移去切片上的 固着液(Reagent B)
8 ．  小心加上XX微升 清理液(Reagent A)，覆盖切片表面
9 ．  小心移去切片上的 清理液(Reagent A)
10．移取XX微升 清理液(Reagent A) 到新的 1.5 毫升离心管
11．加入XX微升含有 预备液(Reagent C) 和 染色液(Reagent D) 的 染色工作液，混匀(注意： 参见注意事项10)
12．小心加上上述 染色工作液到切片上，覆盖切片表面
13．放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟
14．小心移去切片上的 染色工作液
15．小心加上    微升新鲜的 清理液(Reagent A)
16．小心移去 清理液(Reagent A)
17．盖上盖玻片
18．即刻在荧光显微镜下进行观察：激发波长 579nm，散发波长 599nm (线粒体呈现红色)

注意事项
1 ．  本产品为 100 次(固定染色)和 200 次(活体染色)操作
2 ．  操作时，避免污染母液
3 ．  操作时，须戴手套
4 ．  染色前，所有试剂溶液(除 染色液外)需37C预热
5 ．  建议细胞染色完成后，即刻进行荧光检测分析
6 ．  孵育时，必须避免光照
7 ．  剩余的染色工作液可放进－20C储存备用
8 ．  本产品适合活体染色和固定染色，染色剂不易洗掉，染色持久
9 ．  活细胞染色： 1 毫升体系可以使用 1 微升(1：1000 容量比)含有 预备液(Reagent C) 和 染色液(Reagent D) 的 染色工作液
10．根据不同细胞类型，调整 染色工作液的使用剂量(1：100 至 1 ：1000 容量比)，避免过度 染色
11．本产品友好使用于双重染色或重叠染色
12 ．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿， 35mm  培养皿，和各种培养孔板，须相应 调整处理液：

操作容器        建议操作体系
载玻片        100 微升
载玻片培养皿    1 毫升
35mm 培养皿    1 毫升
96 孔培养板    100 微升
48 孔培养板    200 微升
24 孔培养板    500 微升
12 孔培养板    1 毫升
6 孔培养板        2 毫升
25cm2 细胞培养瓶    3 毫升

13．本公司提供系列线粒体分析试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                规格
G&VS10019. 1    活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        100/200 次
G&VS10019. 1A    清理液(Reagent A)                500 毫升
G&VS10019. 1B    固着液(Reagent B)                50 毫升
G&VS10019. 1C    预备液(Reagent C)                10 毫升
G&VS10019. 1D    染色液(Reagent D)                1 毫升
G&VS10019.2    植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        20 次
G&VS10019.3    真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100 次

产品编号            名称                规格
G&VS10006. 1    动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒        10/50 次
G&VS10006.2    动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒        10/50 次
G&VS10006.3    动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒        10 次
G&VS10015    线粒体功能詹纳斯绿 B  (JGB)染色试剂盒        20 次
G&VS10017. 1    活体细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒    20/200 次
G&VS10017.2    纯化线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒        20/200 次
G&VS10017.3    真菌/酵母细胞线粒体损伤/氧化(NAO)荧光测定试剂盒    20/200 次
G&VS10019. 1    活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        100/200 次
G&VS10019.2    植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        20 次
G&VS10019.3    真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100 次
G&VS10020. 1    活体细胞线粒体跟踪试剂盒            100 次
G&VS10020.2    活体细胞线粒体长期跟踪试剂盒            20 次
G&VS10097    纯化线粒体呼吸控制率(RCR)定量检测试剂盒        20 次
G&VS10098    纯化线粒体磷氧比(ADP/O)定量检测试剂盒        20 次
G&VS10101    纯化线粒体肿胀比色法测定试剂盒        50 次
G&VS10102    活体细胞线粒体肿胀流式细胞仪测定试剂盒        20 次