体液氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒产品说明书

主要用途
体液氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂是一种旨在通过荧光染色剂氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯，受到活性氧的氧化下，产生荧光，来定量检测活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。

技术背景
超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯（6-chloromethyl-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetyl ester；CM－H2DCFDA）是取代二氯二氢荧光素二乙酯（2´,7´-dichlorodihydrofluorescin diacetate；DCFH-DA）的升级产品，一旦被过氧化氢、羟自由基或氢氧基、过氧化基、次氯酸等氧化，便产生荧光。据此测定活性氧族的浓度。

产品内容
缓冲液（Reagent A）        毫升
染色液（Reagent B）        微升
稀释液（Reagent C）        毫升
产品说明书         1份

保存方式
保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备
抗凝管：用于采血储存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和工作液配制的容器
培养箱：用于反应孵育
（微型）台式离心机：用于样品操作
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析

实验步骤
一、样品准备
选择一：血浆样品
1．准备好肝素或ACD抗凝管（注意：避免使用EDTA抗凝管）
2．抽取1毫升血液，置于抗凝管里
3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6．移取10微升上述制备的血浆到新的1.5毫升离心管
7．加入xx微升缓冲液（Reagent A），混匀
8．放在冰槽里待测

选择二：血清样品
1．准备好不含抗凝剂的储存管
2．抽取1毫升血液，置于储存管里
3．室温下，静置30分钟，直至血液凝结
4．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
5．小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
7．移取10微升上述制备的血清到新的1.5毫升离心管
8．加入xx微升缓冲液（Reagent A），混匀
9．放在冰槽里待测

选择三：尿液/脑脊液/唾液/精液样品
1．准备好1.5毫升离心管
2．移取1毫升液体到离心管
3．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
4．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管
5．即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6．移取10微升到新的1.5毫升离心管
7．加入xx微升缓冲液（Reagent A），混匀
8．放在冰槽里待测

选择四：细胞培养上清
1．准备1瓶25cm2细胞培养瓶的新鲜待测细胞
2．小心移取细胞培养液到15毫升锥形离心管
3．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为300g
4．小心移取上清液到新的15毫升锥形离心管
5．移取10微升到新的1.5毫升离心管
6．加入xx微升缓冲液（Reagent A），混匀
7．放在冰槽里待测
8．放进37℃培养箱里备用（1小时内）
二、样品测定

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent C），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。
1．准备1个96孔板
2．加入100微升上述制备的待测样品
3．加入xx微升染色工作液
4．轻轻摇动96孔板，混匀
5．放进37℃细胞培养箱里孵育20分钟
6．即刻放进荧光酶标仪检测：（激发波长490nm，散发波长530nm）――RFU增高，表明活性氧族（ROS）含量高

注意事项
1．本产品为50次操作
2．操作时，须戴手套
3．孵育时，避免光照
4．测试前，细胞培养液须新鲜收集，1小时内为最佳
5．培养液上清须澄清
6．如果测定体系变化，则试剂用量相应变化
7．建议染色完成后，即刻进行荧光分析
8．用户可以使用维生素E作为阴性对照
9．本公司同时提供体液活性氧初级荧光测定试剂盒（G&VS10016.12），满足不同用户需求
10．本公司提供系列活性氧分析试剂产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息

编号            名称                规格        
G&VS10016.11    体液氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒    50次    
G&VS10016.11A    清理液（Reagent A）                50毫升
G&VS10016.11B     染色液（Reagent B）                500微升
G&VS10016.11C     稀释液（Reagent C）                10毫升
 
产品编号            名称                    规格
G&VS10016.11    细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质绿色荧光测定试剂盒    20次
G&VS10016.2    细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级绿色荧光测定试剂盒    100次
G&VS10016.3    活体组织氧化应激活性氧（ROS）高质绿色荧光测定试剂盒    8/20次
G&VS10016.4    活体组织氧化应激活性氧（ROS）初级绿色荧光测定试剂盒    40/100次
G&VS10016.5    冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）高质绿色荧光测定试剂盒    50次
G&VS10016.6    冰冻切片氧化应激活性氧（ROS）初级绿色荧光测定试剂盒    50次
G&VS10016.7    真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质绿色荧光测定试剂盒    20次
G&VS10016.8    真菌/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级绿色荧光测定试剂盒    50次
G&VS10016.9    植物细胞内氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒    20次
G&VS10016.10    植物细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒    50次
G&VS10016.11    体液氧化应激活性氧（ROS）高质荧光测定试剂盒        50次
G&VS10016.12    体液氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂盒        50次