CAT#:JW-19-14810
低温运输，-20℃保存

溶藻弧菌探针法LAMP试剂盒

产品及特点
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)属弧菌科弧菌属，是一种短杆状革兰氏阴性细菌。溶藻弧菌是一种重要的水产养殖业病原菌，致使多种鱼、虾和贝类感染，主要症状是运动力下降、皮肤灰暗、鳞片松散并且会伴随体表溃疡，肝脏、肠壁毛细血管和消化道等充血、充水。同时，人体也可通过食用污染后的水产食物引起急性胃肠炎等疾病，严重威胁人类健康。由于溶藻弧菌给世界各地的水产养殖业造成了巨大损失，还威胁人类身体健康，因此对溶藻弧菌的快速准确鉴定有重要作用，为此本公司根据独有的探针法LMAP技术，开发了简单快捷的溶藻弧菌LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增，简单快捷。
3.含荧光探针，扩增的专一性比染料法和电泳法更强。
4.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5.一般30分钟内出结果，比PCR快。
6.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到14 μL。
7.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
8.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
9.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
10.本产品足够50次20 μL体系的探针法LAMP扩增。
11.只可用于科研。

规格及成分
本产品采购5孔盒包装
成份            编号        规格    包装
4×LAMP MasterMix
（探针法，待加酶）        211223a        200 μL    0.5 mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0        11-220319        50 μL    0.5 mL红盖管
20×溶藻弧菌
LAMP引物-探针干粉        yp19-14810    50次    0.5 mL棕色管
溶藻弧菌LAMP阳性对照
（1E4拷贝/μL）        pc14810        250 μL    0.5 mL黄盖管
超纯水            210806        1 mL    1.5 mL蓝盖管
使用手册            19-14810sc    1份    1份
注意：引物干粉管在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10 μL本试剂盒提供的阳性对照（1E4拷贝/μL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。

二、LAMP反应（20 μL体系）
3.反应设置：第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0（50 μL，本试剂盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，轻柔颠倒20次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分            N+2个样品管    LAMP阴性对照    LAMP阳性对照
4×LAMP MasterMix
（探针法，加酶后）            各5 μL        5 μL        5 μL
20×溶藻弧菌LAMP引物-探针混合液    各2 μL        2 μL        2 μL
N+2个样品DNA            各13 μL        -        -
超纯水                -        13 μL        -
第2步所得阳性对照的10倍稀释液        -        -        13 μL
4.置于荧光定量PCR仪中65℃保温60分钟进行扩增，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。

三、结果分析
5.样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
    
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