CAT#:JW-19-24700
低温运输，-20℃保存

疟原虫通用探针法qLAMP试剂盒

产品及特点
疟原虫是疟疾的病原体。疟原虫为真核单细胞生物，经由按蚊叮咬传播，在人体内先后经过肝内无性繁殖和红细胞内有性繁殖，大量破坏红细胞而致病。该病特征性表现为间歇性发作的寒战、高热，继以大汗缓解。因此对疟原虫进行快速灵敏的诊断具有重要的意义。本产品是根据PCR原理开发的疟原虫通用检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增，简单快捷。
3.含荧光探针，扩增的专一性比染料法和电泳法更强。
4.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5.一般30分钟内出结果，比PCR快。
6.引物根据疟原虫通用DNA保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
7.上样量大，对20 mL的反应体系，最大样品加样量高达到14 mL。
8.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
10.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
11.本产品足够50次20 mL体系的探针法LAMP扩增。
12.只可用于科研。

规格及成分
本产品采购五孔盒包装
成份            编号        规格    包装
4×LAMP MasterMix
（探针法，待加酶）        211223a        200 mL    0.5 mL本色管
Bst DNA聚合酶2.0        11-220319        50 mL    0.5 mL红盖管
20×疟原虫通用LAMP
引物-探针混合液干粉        yp19-24700    50次    0.5 mL棕盖管
疟原虫通用LAMP
阳性对照（1×10E4拷贝/mL）    pc19-24700    250 mL    0.5 mL黄盖管
超纯水            210806        1 mL    1.5 mL蓝盖管
使用手册            19-24700sc    1份    无
注意：使用前请在20×疟原虫通用LAMP引物-探针混合液干粉中加入55 mL超纯水，涡旋震荡半分钟溶解。没用完的需要放-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
样品DNA。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10 mL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/mL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。
二、LAMP反应（20 mL体系）
3.反应设置：第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0（50 mL，本试剂盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，轻柔颠倒 20 次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分        N+2个样品管    LAMP阴性对照    LAMP阳性对照
4×LAMP MagicMix
（探针法，已加酶）    各5 mL        5 mL        5 mL
20×疟原虫通用LAMP
引物-探针混合液    各1 mL        1 mL        1 mL
N+2个样品DNA    各14 mL        -        -
超纯水        -        14 mL        -
疟原虫通用LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/mL）    -    -    14 mL
4.置于荧光定量PCR仪中65℃保温60分钟进行扩增，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。
三、结果分析
5.样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
    
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