CAT#:JW-19-53710
低温运输，-20℃保存

酵母菌通用探针法LAMP试剂盒

产品及特点
酵母菌属（Yeast）属酵母科，是一种单细胞真菌。酵母广泛分布于整个自然界，主要是生长在偏酸性以及潮湿的含糖环境下，是一种典型的兼性厌氧微生物，在有氧和无氧条件下都能够存活。酵母菌是一种天然发酵剂，可广泛用于食品发酵、酿造啤酒和制造酒精等，如果使用过量，也会导致食物腐烂，对食品产业有着一定的影响。同时，酵母菌属其中也包含致病菌，如假丝状酵母菌会生长在潮湿的阴道壁黏膜上引起阴道炎，克鲁斯假丝酵母感染后引起的念珠菌血症，死亡率可达20%，对人体健康产生极大威胁，因此快速检测酵母菌具有重要的意义，为此本公司根据独有的探针法LMAP技术，开发了简单快捷的酵母菌通用LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增，简单快捷。
3.含荧光探针，扩增的专一性比染料法和电泳法更强。
4.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5.一般30分钟内出结果，比PCR快。
6.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到14 μL。
7.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
8.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
9.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
10.本产品足够50次20 μL体系的探针法LAMP扩增。
11.只可用于科研。

规格及成分
本产品采购5孔盒包装
成份                                                                编号                  规格            包装
4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶）    211223a                200 μL           0.5 mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0                                    11-220319               50 μL           0.5 mL红盖管
20×酵母菌通用
LAMP引物-探针干粉                                    yp19-53710ji        50次           0.5 mL棕色管
酵母菌通用LAMP阳性对照
（1E4拷贝/μL）                            pc53710-GU319992           250 μL            0.5 mL黄盖管
超纯水                                                         210806                  1 mL            1.5 mL蓝盖管
使用手册                                               19-53710sc                   1份           1份
注意：引物干粉管在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110 μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10 μL本试剂盒提供的阳性对照（1E4拷贝/μL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。
二、LAMP反应（20 μL体系）
3.反应设置：第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0（50 μL，本试剂盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，轻柔颠倒20次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分                           N+2个样品管    LAMP阴性对照    LAMP阳性对照
4×LAMP MasterMix
（探针法，加酶后）        各5 μL        5 μL        5 μL
20×酵母菌通用LAMP引物-探针混合液    各2 μL    2 μL    2 μL
N+2个样品DNA               各13 μL        -        -
超纯水                              -                13 μL        -
第2步所得阳性对照的10倍稀释液    -        -        13 μL
4.置于荧光定量PCR仪中65℃保温60分钟进行扩增，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。
三、结果分析
5.样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
    
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