CAT#:JW-19-54000
低温运输，-20℃保存

小鼠白血病病毒探针法qRT-LAMP试剂盒

产品及特点
小鼠白血病病毒（MuLV或MLV，Murine leukemia viruses）是一种逆转录病毒，因其能够感染小鼠宿主和其他脊椎动物并引发癌症而闻名。基于莫洛尼鼠白血病病毒的逆转录病毒载体被广泛用于基因转移到各种目标细胞。小鼠白血病病毒（MuLV）分为两类: ①急性转化MuLV:Abelson,MuLV为其代表,基因组合有v-abl基因,编码产生p120gag-abl磷蛋白,诱发小鼠B淋巴细胞白血病; ②慢性转化MuLV:极大多数MuLV均属于此类。这类白血病与人类的Bcr-Abl阳性白血病的发生过程极为相似。因此对小鼠白血病病毒的快速准确鉴定具有重要意义。为此本公司根据独有的探针法LMAP技术，开发了简单快捷的小鼠白血病病毒RT-LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供RNA样品。
2.恒温扩增，简单快捷。
3.含荧光探针，扩增的专一性比染料法和电泳法更强。
4.检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上。
5.一般35分钟内出结果，比RT-PCR快。
6.引物根据小鼠白血病病毒基因组的保守区设计，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
7.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到12 μL。
8.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
10.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
11.本产品足够50次20 μL体系的探针法RT-LAMP扩增。
12.只可用于科研。

规格及成分
本产品采购5孔盒包装
成份                编号        规格    包装
RT-LAMP MasterMix
（可视化染料-荧光染料，待加酶）    211224a        200μL    0.5 mL本色盖
逆转录酶-扩增酶混合液        211208b        100μL    0.5 mL红盖管
20×小鼠白血病病毒RT-LAMP
引物-探针干粉            yp19-54000-3    50次    1.5mL棕色管
小鼠白血病病毒RT-LAMP阳性
对照（1×10E4拷贝/μL）        pc54000-Y138    250μL    0.5mL黄盖管
超纯水                210806    1 mL    1.5mL蓝盖管
使用手册                19-54000sc    1份    无
注意：使用前请在RT-LAMP引物-探针干粉中加入110μL超纯水，充分震荡半分钟溶解。没用完的需要放-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为24个月。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品RNA的制备
1.用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。
二、RT-LAMP反应（20μL体系）
3.反应设置：第一次使用一个新的试剂盒时，必须先将100uL逆转录酶-扩增酶混合液全部加入到RT-LAMP MasterMix（可视化染料-荧光染料，待加酶）中，盖上盖子后轻柔颠倒1分钟混匀，然后再取用。
4.反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分            N+2个样品管    RT-LAMP阴性对照    RT-LAMP阳性对照
RT-LAMP MasterMix
（可视化染料-荧光染料，已加酶）    各6 μL    6 μL    6 μL
20×小鼠白血病病毒RT-LAMP引物-探针混合液    各2 μL    2 μL    2 μL
N+2个样品RNA            各12 μL    -    -
超纯水                -    12 μL    -
小鼠白血病病毒RT-LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    -    -    12 μL
5.置于荧光定量PCR仪中65℃保温60分钟进行扩增，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。
三、结果分析
6.样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
    
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