CAT#:JW-19-39543
低温运输，-20℃保存

大肠杆菌O104:H4型探针法LAMP试剂盒

产品及特点
大肠杆菌O104:H4型（Escherichia coli O104:H4）是肠出血性（Enterohemorrhagic）大肠杆菌的一个菌株，但它有部分肠聚集性大肠杆菌（Enteroaggregative）基因。该菌株导致了2011年O104:H4型大肠杆菌疫情，它分泌的毒素可损伤肠道黏膜，甚至进入血液中破坏红血球，导致溶血性病变，这种症状在肾脏中最为明显，常导致急性肾衰竭，即为溶血性尿毒综合症，因此对大肠杆菌O104:H4型的快速准确鉴定具有重要意义。为此本公司根据独有的探针法LMAP技术，开发了简单快捷的大肠杆菌O104:H4型LAMP检测试剂盒，它具有下列特点：
1.即开即用，用户只需要提供DNA样品。
2.恒温扩增，简单快捷。
3.含荧光探针，扩增的专一性比染料法和电泳法更强。
4.检测灵敏性一般比PCR高10倍以上。
5.一般30分钟内出结果，比PCR快。
6.引物根据大肠杆菌O104:H4型基因组的保守区设计，不会跟其他生物的DNA发生交叉反应。
7.上样量大，对20 μL的反应体系，最大样品加样量高达到14 μL。
8.内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
9.提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
10.本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
11.本产品足够50次20 μL体系的探针法LAMP扩增。
12.只可用于科研。
规格及成分
本产品采购5孔盒包装
成份                编号        规格    包装材料
4×LAMP MasterMix （探针法，待加酶）    211223a        200μL    0.5mL绿盖管
Bst DNA聚合酶2.0            11-220319        50μL    0.5mL红盖管
20×大肠杆菌O104:H4型LAMP引物-探针混合液干粉    yp19-39543    50次    0.5mL白盖管
大肠杆菌O104:H4型LAMP阳性对照（1×10E4拷贝/μL）    pc39543-XXXXX    250μL    0.5mL黄盖管
超纯水                210806    1 mL    1.5mL蓝盖管
使用手册                19-39543sc    1份    无
注意：使用前请在20×大肠杆菌O104:H4型LAMP引物-探针混合液干粉中加入55μL超纯水，涡旋震荡半分钟溶解。没用完的需要放-20℃保存。

运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限为一年。

自备试剂
待测样品。

使用方法
一、样品DNA的制备
1.用自选方法纯化样品DNA，本试剂盒跟市场上大多数DNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
2.如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照（PC）和一个样品制备阴性对照（NC）。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照（1×10E4拷贝/μL）加一定量的水作为样品制备PC，加水后的总体积跟所用核酸纯化试剂盒所要求的起始样本体积一致。NC用水替代。
二、LAMP反应（20μL体系）
3.反应设置：第一次使用时请把所有Bst DNA聚合酶2.0（50μL，本试剂盒提供）加入到 4×LAMP MasterMix（探针法，待加酶）中，轻柔颠倒 20 次充分混匀，然后再取用。如果有N+2个DNA纯化样品，则最好设置N+4个LAMP扩增，增加LAMP扩增阳性对照和LAMP扩增阴性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分            N+2个样品管    LAMP阴性对照    LAMP阳性对照
4×LAMP MagicMix
（探针法，加酶后）        各5 μL        5 μL        5 μL
20×大肠杆菌O104:H4型LAMP引物-探针混合液    各1 μL    1 μL    1 μL
N+2个样品DNA        各14 μL        -        -
超纯水            -        14 μL        -
大肠杆菌O104:H4型LAMP阳性对照
（1×10E4拷贝/μL）        -    -    14 μL
4.置于荧光定量PCR仪中65℃保温60分钟进行扩增，每分钟在FAM通道采集一次荧光信号。
三、结果分析
5.样品制备阳性对照和LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
    
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