纯化线粒体内膜功能/膜电位荧光测定试剂盒产品说明书

主要用途
纯化线粒体内膜功能/膜电位荧光测定试剂是一种旨在通过高度敏感的阳离子荧光羰花青染料结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体膜电位的变化，即内膜电负性的增高或降低，来分析线粒体内膜功能的完整性的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种线粒体制备物的功能检测。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老等的研究。产品严格无菌，即到即用，活体检测，操作极为简易，性能稳定。

技术背景
阳离子荧光染色剂羰花青（5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一种对膜电位高度敏感的染色剂。它特异性地进入线粒体，分布和结合在线粒体基质上。线粒体膜电位的高低变化决定了羰花青的分布浓度。电位高，羰花青形成聚集体，而浓度高，荧光显色为红色或桔红色；反之，则为绿色。荧光减弱表明线粒体内膜功能受到损害。

产品内容
保存液（Reagent A）        毫升
染色液（Reagent B）        微升
稀释液（Reagent C）        毫升
产品说明书        1份

保存方式
保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照；有效保证12月

用户自备
1.5毫升离心管：用于线粒体染色的容器
比色皿或96孔板：用于荧光定量的容器
（共聚焦）荧光显微镜：用于线粒体荧光定性分析
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于线粒体荧光定量分析

实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置入冰槽里融化，稀释液（Reagent C）放进37℃恒温水槽里预热。然后移出xx微升染色液（Reagent B）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稀释液（Reagent C），混匀后，在冰槽里静置，并标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作
一、（共聚焦）荧光显微镜观察（大量检测）
1．从纯化的线粒体样品中移出至少含107细胞中提取的线粒体到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里
2．加入适量的保存液（Reagent A）至最终容量为100微升（含有50微克线粒体蛋白质为理想状态）
3．加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀释液（Reagent C）的染色工作液，轻柔混匀
4．放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）
5．即刻移入到载玻片上
6．放上盖玻片，在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察（单滤波）：
观察红色荧光：滤波器激发波长490nm，散发波长590nm或罗丹明（rhodamine）滤波器激发波长540nm，
散发波长570nm或德州红（Texas Red）滤波器激发波长590nm，散发波长610nm――

二、（共聚焦）荧光显微镜观察（小量检测）
1．从纯化的线粒体样品中移出10微升纯化线粒体（含有5微克线粒体蛋白为理想状态）到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里
2．加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀释液（Reagent C）的染色工作液，轻柔混匀
3．放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）
4．即刻移入到载玻片上
5．放上盖玻片，在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察（单滤波）：
观察红色荧光：滤波器激发波长490nm，散发波长590nm或罗丹明（rhodamine）滤波器激发波长540nm，
散发波长570nm或德州红（Texas Red）滤波器激发波长590nm，散发波长610nm――

三、荧光酶标仪检测
1．分别加入xx微升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液到96孔板的每个孔里
2．加入10微升纯化的线粒体样品（含有5微克线粒体蛋白为理想状态）
3．轻轻摇匀96孔板
4．放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）
5．即刻放进荧光酶标仪测定（单一测定）：
激发波长490nm，散发波长590nm，获得相对荧光单位（RFU）：
三、荧光分光光度仪比色皿检测
1．从纯化的线粒体样品中移出至少含107细胞中提取的线粒体到新的预冷的1.5毫升离心管，置入冰槽里
2．加入适量的保存液（Reagent A）至最终容量为100微升（含有50微克线粒体蛋白为理想状态）
3．加入xx微升含有染色液（Reagent B） 和稀释液（Reagent C）的染色工作液到1毫升比色皿里（若使用2毫升比色皿，用量相应加倍）
4．加入100微升纯化的线粒体样品
5．上下倾倒比色皿，轻轻混匀
6．放进暗室里，在室温下孵育10分钟（注意：检测前置于冰槽里）
7．即刻放进荧光分光光度计测定（单一测定）：
激发波长490nm，散发波长590nm，获得相对荧光单位（RFU）：

注意事项
1．本产品为10次（1毫升工作液）和100次（100微升工作液）操作
2．操作时，须戴手套
3．染色完成后，即刻进行荧光检测分析
4．孵育时，避免光照
5．纯化线粒体检测建议采用红色单滤波或单一测定则可，无需测定绿色滤波
6．建议待测样本线粒体蛋白总量至少为5微克（本公司提供线粒体溶解试剂盒G&VS10018为后续的线粒体蛋白浓度测定的预处理试剂盒和 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
7．本公司提供缬氨霉素溶液（G&VS12042），作为线粒体内膜破坏分子，观察荧光显著减弱现象
8．本公司提供系列线粒体试剂分析产品
 
质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                规格        
G&VS10013.1    纯化线粒体内膜功能/膜电位荧光测定试剂盒        10/100次    
G&VS10013.1A    保存液（Reagent A）                5毫升
G&VS10013.1B     染色液（Reagent B）                500微升
G&VS10013.1C     稀释液（Reagent C）                50毫升
G&VS12042    缬氨霉素溶液（0.1 mM）            10毫升
G&VS30030.1    Bradford蛋白质浓度定量试剂盒            100次

产品编号            名称                规格
G&VS10006.1    动物细胞/组织线粒体粗提分离试剂盒        10/50次
G&VS10006.2    动物细胞/组织活性线粒体分离试剂盒        10/50次
G&VS10006.3    动物细胞/组织高质纯化线粒体分离试剂盒        10次
G&VS10013.1    纯化线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒        100次
G&VS10013.2    活体细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒        20次
G&VS10013.3    完全线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒        20次
G&VS10013.4    活体组织线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒        10次
G&VS10013.5    真菌/酵母细胞线粒体内膜功能/膜电位测定试剂盒    20次
G&VS10014.1    线粒体外膜功能检测试剂盒            20次
G&VS10014.2    纯化线粒体细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒        20次
G&VS10014.3    细胞/组织悬液细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒    20次
G&VS10014.4    纯化细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒        20次
G&VS10014.5    真菌/酵母细胞悬液细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒    20次
G&VS10014.6    植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒        20次
G&VS10015    线粒体功能詹纳斯绿B（JGB）染色试剂盒        20次
G&VS10019.1    活体细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        100/200次
G&VS10019.2    植物组织线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        20次
G&VS10019.3    真菌/酵母细胞线粒体形态/活性荧光染色试剂盒    100次
G&VS10019.4    纯化线粒体形态/活性荧光染色试剂盒        100次