通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书

主要用途
通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过组织/细胞内β-半乳糖苷酶在酸性条件下稳定表达，催化生成深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的细胞作为细胞复制性衰老（replicative senescence）的分子特征来识别和探测衰老细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于细胞生物学研究。其适用于各种人体和动物细胞、活体组织以及冰冻组织切片检测。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感。
 
技术背景
细胞复制性衰老是细胞控制其生长潜能的保障机制。衰老细胞停滞在细胞周期的G1期，表现出细胞扁平、胀大、颗粒增多的形态特征，尤其在酸性条件下，细胞内β-半乳糖苷酶活性增加，而成为细胞衰老的生物学标记。
 
产品内容
清理液（Reagent A）      毫升
固定液（Reagent B）        毫升
酸性液（Reagent C）        毫升
稀释液（Reagent D）    毫升
染色液（Reagent E）        毫升
产品说明书          x1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E）用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月

用户自备
2毫升离心管：用于配制染色工作液
15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液
恒温培养箱：用于染色孵育
切片仪：用于石蜡或冰冻切片
光学显微镜：用于观察染色后的细胞

实验步骤
一、细胞染色
操作一、25cm2细胞培养瓶染色
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到2毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：
1．小心抽去25cm2细胞培养瓶里的培养液
2．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
3．小心抽去清理液
4．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面
5．在室温下孵育5分钟
6．小心抽去固定液
7．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面
8．小心抽去酸性液
9．重复实验步骤7和8两次
10．小心加入xx毫升预热的染色工作液，覆盖整个细胞表面
11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）
12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色
 
操作二、24孔细胞培养板染色
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：
1．小心抽去24孔细胞培养板里的培养液
2．每孔加入xx微升清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
3．小心抽去每孔里的清理液
4．每孔加入xx微升固定液（Reagent B），覆盖整个生长表面
5．在室温下孵育5分钟
6．小心抽去固定液
7．每孔加入xx微升酸性液（Reagent C），清洗细胞表面
8．小心抽去酸性液
9．重复实验步骤7和8一次
10．每孔加入xx微升预热的染色工作液，覆盖整个细胞表面
11．放进37℃培养箱，孵育3小时至16小时，或细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）
12．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色

二、冰冻切片染色
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升锥形离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进37℃恒温水槽里预热，标记为染色工作液。然后进行下列操作：
1．准备10片待测的厚为5至10微米的冰冻切片
2．置于室温下，小心加上xx微升预冷的清理液（Reagent A），铺满整个切片表面
3．小心移去切片上的清理液（Reagent A）
4．小心加上xx微升预冷的固着液（Reagent B），铺满整个样品表面
5．室温下孵育10分钟
6．小心移去切片上的固着液（Reagent B）
7．小心加上xx微升酸性液（Reagent C），铺满整个切片表面
8．室温下孵育5分钟
9．小心移去切片上的酸性液（Reagent C）
10．重复实验步骤7至9二次
11．小心加上xx微升预热的染色工作液，铺满整个切片表面
12．在37℃湿润培养箱里，孵育3至24小时，或组织细胞呈现蓝色（注意：避免液体蒸发）
13．小心移去切片上的染色工作液
14．小心加上xx微升清理液（Reagent A），铺满整个切片表面
15．小心移去切片上的清理液（Reagent A）
16．放上盖玻片或封片
17．即刻在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶活性的地方，呈现蓝色

三、全组织染色
实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，放进暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作：
1．准备1个6孔细胞培养板
2．放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米厚，1厘米长；如果过大，最好刀切处理一下）
3．将组织压平
4．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗组织样本
5．小心抽去清理液
6．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），浸没整个组织
7．在4℃条件下孵育2小时
8．小心抽去固定液
9．小心加入xx毫升酸性液（Reagent C），清洗组织样本
10．在室温下孵育15分钟
11．小心抽去净化液
12．重复实验步骤9至11一次
13．小心加入xx毫升染色工作液，浸没整个组织
14．放进37℃培养箱，孵育16小时，避免光照
15．后续石蜡切片（6微米厚）或冰冻切片（10微米厚）
16．在光学显微镜下观察和计数：表达衰老特异性β- 半乳糖苷酶活性的组织细胞为阳性细胞，呈现蓝色

注意事项
1．本产品为100次（4个24孔板和冰冻切片）、20次（20个25cm2细胞培养瓶）或10次（全组织）操作
2．操作时，须戴手套
3．本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到最优化
4．使用时，避免污染母液，否则出现絮状沉淀，影响实验效果
5．染色工作液避免光照
6．原始组织大小可以1厘米厚、2厘米长进行染色，但建议越小越佳
7．用户根据实际需求，按比例配制试剂用量
8．细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育24小时
9．细胞染色最长孵育时间为24小时
10．本产品染色敏感，尤其对于微弱酶活性仍然可以检测，用户可以根据情况调整染色时间和染色工作液浓度，使染色恰到好处
11．孵育时避免液体蒸发
12．细胞呈现蓝色的部位为衰老细胞特异性β-半乳糖苷酶活性的地方
13．全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限
14．染色后的细胞样品可以在4℃冰箱里长期保存，同样须避免光照
15．本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整处理液：
操作容器        建议处理液规格
载玻片        100微升
载玻片培养皿    1毫升
35mm培养皿    1毫升
96孔培养板    100微升
48孔培养板    200微升
24孔培养板    500微升
12孔培养板    1毫升
6孔培养板        2毫升
25cm2细胞培养瓶    3毫升
16．本公司提供系列细胞衰老分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定着色敏感

使用承诺
极威生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称                规格    
G&VS10012.4    通用型细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10/100次
G&VS10012.4A     清理液（Reagent A）              毫升
G&VS10012.4B     固定液（Reagent B）                毫升
G&VS10012.4C     酸性液（Reagent C）                毫升
G&VS10012.4D     稀释液（Reagent D）            毫升
G&VS10012.4E     染色液（Reagent E）                毫升

试剂盒订购信息

产品编号            名称                规格
G&VS10012.1    细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    100/250次
G&VS10012.2    全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10次
G&VS10012.3    冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    50次
G&VS10012.4    通用型组织细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10/100次
G&VS80056.1    细胞衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒        50次
G&VS80056.2    全组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒        10次
G&VS80056.3    冰冻切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒    50次
G&VS80056.4    石蜡切片组织衰老特异性脂褐素原位染色试剂盒    50次
G&VS10037.1    细胞β-半乳糖苷酶化学发光法定量检测试剂盒    20次
G&VS10037.2    细胞β-半乳糖苷酶比色法定量检测试剂盒        20次