细胞样品亚细胞结构分离试剂盒产品说明书

主要用途
细胞样品亚细胞结构分离试剂是一种旨在通过细胞裂解和差速离心而获得动物细胞核、细胞浆和细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。适宜于各种动物细胞的亚细胞结构和功能的研究和鉴定。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，操作简便，分离清晰，成分完整。
 
技术背景
细胞分离成亚细胞结构成分单位是细胞生物学研究的基本手段。采用轻柔的机械物理方法或化学去污剂方法实现细胞裂解，然后运用差速离心的方法将细胞成分分离，由此获得独立的保留其原生化特性的具有活力的细胞器和大分子成分，从而进行细胞器和亚细胞部位的结构与功能的相关研究，同时检测各种分子元素的定位、运作和运输。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
保存液（Reagent B）        毫升
萃取液（Reagent C）        毫升
活性液（Reagent D）    微升
产品说明书         1份

保存方式
保存活性液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月
 
用户自备
HANK平衡盐溶液（G&VS12028）或PBS溶液（G&VS12033）：用于清理细胞
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（G&VS12052）：用于细胞处理所需的培养基
1.5毫升离心管：用于细胞组分操作和保存的容器
2毫升离心管：用于细胞组分操作的容器
50毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心的容器
台式离心机：用于细胞组分分离
超速离心机：用于分离纯化细胞浆成分
DOUNCE匀浆器：用于裂解细胞
显微镜：用于观察细胞分离组分

实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的活性液（Reagent D）从－70℃的冰箱里取出，放进冰槽里。溶化后，分别移出xx微升活性液（Reagent D）和xx的萃取液（Reagent C）到1.5毫升离心管里，混匀后，标记为萃取工作液，放进冰槽里。然后进行下列操作。
一、细胞预处理
1．准备3瓶75cm2细胞培养瓶的细胞（5 X 107细胞）
2．分别小心抽去细胞培养液
3．分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖细胞生长表面
4．分别小心抽去清洗液
5．重复实验步骤3至4一次
6．加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（TRYPSIN/EDTA），铺满整个培养表面
7．放进37℃培养箱孵育3分种
8．轻轻抖动培养瓶，使细胞脱落
9．分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液，混匀
10．合并移入到1个50毫升锥形离心管
11．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为200g（或1000rpm，例如EPPENDORF 5810R）
12．小心抽去上清液
13．加入xx清理液（Reagent A），轻轻混匀细胞颗粒群
14．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为200g（或1000rpm，例如EPPENDORF 5810R）
15．小心抽去上清液
16．重复实验步骤13至15一次
17．加入xx清理液（Reagent A），充分混匀细胞颗粒群
18．放进冰槽里（接到实验步骤二的第1步）
19．移出500微升细胞混匀物到1.5毫升离心管
20．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm，例如EPPENDORF 5415D）
21．小心抽去上清液
22．加入xx保存液（Reagent B），轻轻混匀
23．放进－70℃冰箱里长期保存――

二、细胞核组分分离
1．将上述实验步骤一的第18步在冰槽里的50毫升锥形离心管放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为200g（或1000rpm，例如EPPENDORF 5810R）
2．小心抽去50毫升锥形离心管的上清液
3．加入xx含有活性液（Reagent D）和萃取液（Reagent C）的萃取工作液，充分混匀细胞颗粒群
4．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，用匀浆棒匀化细胞40下
5．置于冰槽中孵育30分钟
6．再次使用匀浆棒匀化细胞40下
（选择步骤：移出50微升细胞匀浆物在载玻片上，通过显微镜观察，细胞溶解而细胞核是完整的；如    果细胞没有溶解，显微镜下可见发亮的细环状结构，这样需要进一步匀化细胞，但切莫过度匀化细胞）
7．移取所有细胞匀浆物到2毫升离心管
8．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm例如EPPENDORF 5415D）
9．小心移出上清液到新的1.5毫升离心管
10．加入xx萃取液（Reagent C）到上述2毫升离心管，充分混匀沉淀颗粒
11．放进预冷的DOUNCE匀浆器匀化40下
12．置于冰槽中孵育15分钟
13．再次使用匀浆棒匀化细胞10下
14．移回所有匀浆物到2毫升离心管
15．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm例如EPPENDORF 5415D）
16．小心移出上清液合并到上述实验步骤二的第9步的1.5毫升离心管
17．再次加入xx萃取液（Reagent C）到2毫升离心管，充分混匀沉淀颗粒
18．同时将1.5毫升离心管和2毫升离心管放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为500g（或2500rpm例如EPPENDORF 5415D）
19．（分别）小心移出上清液（合并）到1个超速离心管（接到实验步骤三的第1步或第5步）
20．分别加入xx保存液（Reagent B）到1.5毫升离心管和2毫升离心管，轻轻混匀沉淀颗粒
21．合并成1管，放进－70℃冰箱里长期保存――

三、细胞器和细胞浆组分分离
1．（选择步骤）将实验步骤二的第19步的上清液，放进4℃微型台式离心机离心30分钟，速度为10000g（或10000rpm例如EPPENDORF 5415D）
2．（选择步骤）小心移出上清液到新的超速离心管
3．（选择步骤）加入xx保存液（Reagent B）到沉淀颗粒，轻轻混匀
4．（选择步骤）移入到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——
5．将实验步骤二的第19步的上清液或实验步骤三的第4步的上清液，放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g （注意：参见注意事项7）
6．小心移出3毫升上清液到2个新的1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——
7．加入xxENMED保存液（Reagent B）到沉淀颗粒，轻轻混匀
8．移入到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——
 
注意事项
1．本产品为10次操作
2．所有操作均须在4℃状态下进行
3．细胞核组分可以被用来进行电泳迁移率变动分析实验去研究转录因子或活体外转录反应；P53可作为细胞核成分的标准对照
4．对于易于脆裂的细胞核或难以溶解的细胞，采用化学去污剂加上物理匀浆法是优先推荐的技术处理
5．实验步骤二的第6至19步，旨在尽最大可能溶解细胞，充分获得各种组分，建议用户进行操作；如果用户没有这一需求，可以跳过实验步骤二的第9至18步
6．实验步骤三的第1至4步，旨在获得独立的线粒体组分，如果用户没有这一需求，可以跳过
7．获得细胞浆成分，可以采取不同离心速度：最低不得低于10000g（或10000rpm例如EPPENDORF 5415D），由此获得的便是粗提细胞浆组分；根据用户需求，增加离心速度，其纯度相应增加，最高不要超过速度为100000g
8．所有组分建议保存在－70℃冰箱里，长期保持活性
9．本产品保留所有细胞内成分
10．本产品的分离成分可用于各种后续操作
11．本公司提供系列亚细胞分离和分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
3．本产品经鉴定亚细胞结构分离清晰，维持正常活性

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                规格
G&VS10005.1    细胞样品亚细胞结构分离试剂盒            10次
G&VS10005.1A     清理液（Reagent A）                500毫升
G&VS10005.1B     保存液（Reagent B）                50毫升
G&VS10005.1C     萃取液（Reagent C）                100毫升
G&VS10005.1D     活性液（Reagent D）            100微升
G&VS12028     HANK平衡盐缓冲溶液                500毫升
G&VS12033    PBS平衡盐缓冲溶液                500毫升
G&VS12024    胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液            100/500毫升
G&VS12052    DMEM完全细胞培养基            500毫升
产品编号            名称        规格
G&VS10005.1    细胞样品亚细胞结构分离试剂盒    10次
G&VS10005.2    组织样品亚细胞结构分离试剂盒    10次
G&VS10040.1    内质网分离试剂盒        10次
G&VS10040.2    内质网高质纯化试剂盒    10次
G&VS10041.1    通用型内质网形态染色试剂盒    100次
G&VS10041.2    内质网形态高质染色试剂盒    20次
G&VS10066.1    动物组织肌质网粗提分离试剂盒    10次
G&VS10066.2    动物组织活性肌质网分离试剂盒    10次
G&VS10066.3    动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒    10次
G&VS10066.4    动物组织肌质网横小管（T Tube）分离试剂盒    10次
G&VS10066.5    动物组织肌质网三联体（TRIAD）分离试剂盒    10次
G&VS10100    动物细胞核分离试剂盒    50次
G&VS10117    细胞微管分离试剂盒        10次
G&VS10118    细胞溶酶体分离试剂盒    10次
G&VS10119    细胞过氧化酶体分离试剂盒    10次
G&VS10121    细胞溶酶体形态染色试剂盒    20次