植物样品亚细胞结构分离试剂盒产品说明书

主要用途
植物样品亚细胞结构分离试剂是一种旨在通过物理化学裂解和差速离心而获得植物细胞或组织的细胞壁、细胞核、细胞浆和细胞器组分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适宜于各种新鲜培养细胞或植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）等的亚细胞结构和功能的研究和鉴定。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，操作简便，分离清晰，成分完整。
 
技术背景
细胞分离成亚细胞结构成分单位是细胞生物学研究的基本手段。采用轻柔的机械物理方法或化学方法实现细胞裂解，然后运用差速离心的方法将细胞成分分离，由此获得独立的保留其原生化特性的具有活力的细胞器和大分子成分，从而进行细胞器和亚细胞部位的结构与功能的相关研究，同时检测各种分子元素的定位、运作和运输。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
平衡液（Reagent B）        毫升
胞壁分离液（Reagent C）    毫升
胞核分离液（Reagent D）    毫升
保存液（Reagent E）        毫升
产品说明书         1份

保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里，有效保证6月
 
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
2毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于样品操作分
DOUNCE匀浆器：用于样品操作

实验步骤
一、细胞壁组分分离
1．准备好新鲜活体的植物组织，例如叶片、谷粒、种子等，并秤重以确定1克组织重量（实验前最好置于暗室5天）或107植物细胞
2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4．移入一个液氮冻存管
5．即刻放入液氮罐过夜
6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）
7．放进一个15毫升锥形离心管
8．加入xx毫升预冷的平衡液（Reagent B）（注意：悬浮细胞可以从这一步开始）
9．涡旋震荡5秒，充分混匀
10．即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器
11．在冰槽里用匀浆棒匀化组织或细胞（约40下），直至组织或细胞颗粒微量残留（注意：避免过度匀浆）
12．将所有匀浆物移回到15毫升锥形离心管
13．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为300g
14．小心移取上清液到新的15毫升离心管，然后直接转接到实验步骤二的第1步
15．加入xx毫升预冷的胞壁分离液（Reagent C）到颗粒管，混匀
16．即刻再次放入预冷的DOUNCE匀浆器
17．在冰槽里用匀浆棒匀化组织或细胞（约40下），直至组织或细胞颗粒消失
18．将所有匀浆物移回到15毫升锥形离心管
19．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为200g——此步骤去除细胞残渣
20．小心移取上清液到新的15毫升离心管
21．（选择步骤）重复实验步骤18至20一次
22．放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为800g
23．小心抽去上清液——这是细胞壁组分
24．（选择步骤）加入xx毫升预冷的清理液（Reagent A）到颗粒管，混匀
25．（选择步骤）放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为1000g
26．（选择步骤）小心抽去上清液
27．（选择步骤）重复实验步骤24至26二次
28．加入xx至xx微升保存液（Reagent E）（注意：沉淀物较难混匀溶解；建议使用特殊溶解液）
29．即刻放进－70℃冰箱里保存或继续后续操作

二、细胞核组分分离
1．将上述实验步骤一的第14步在冰槽里的15毫升锥形离心管放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为500g
2．小心移取上清液到新的15毫升锥形离心管，然后直接转接到实验步骤三的第1步
3．加入xx毫升胞核分离液（Reagent D），充分混匀颗粒群
4．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，用匀浆棒匀化细胞10下
5．置于冰槽中孵育30分钟
6．再次使用匀浆棒匀化细胞10下
7．移取所有匀浆物到2毫升离心管
8．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为500g
9．小心抽去上清液
10．加入xx至xx微升保存液（Reagent E），轻轻混匀沉淀颗粒
11．放进－70℃冰箱里长期保存――这是细胞核成分，其中包含细胞核和细胞骨架集聚物

三、细胞器和细胞浆组分分离
1．（选择步骤）将实验步骤二的第2步的上清液，放进4℃台式离心机离心30分钟，速度为1000g
2．（选择步骤）小心移出上清液（这是粗提细胞浆成分）到新的15毫升锥形离心管（直接转接到下列步骤5）
3．（选择步骤）加入xx至xx微升保存液（Reagent E）到沉淀颗粒，轻轻混匀
4．（选择步骤）转移到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是叶绿体成分
5．（选择步骤）将该实验步骤第2步的上清液，放进4℃台式离心机离心30分钟，速度为10000g
6．（选择步骤）小心移出上清液（这是粗提细胞浆成分）到新的15毫升锥形离心管（直接转接到下列步骤9）
7．（选择步骤）加入xx微升保存液（Reagent E）到沉淀颗粒，轻轻混匀
8．（选择步骤）转移到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是线粒体成分
9．将该实验步骤第6步的上清液或第2步的上清液，放进4℃超速离心机离心60分钟，速度为100000g （注意：参见注意事项4）
10．小心移出5毫升上清液到新的15毫升锥形离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是纯化细胞浆成分
11．加入xx至xx微升保存液（Reagent E）到沉淀颗粒，轻轻混匀
12．转移到1.5毫升离心管，放进－70℃冰箱里长期保存——这是其它细胞器成分
 
注意事项
1．本产品为10次操作
2．所有操作均须在4℃状态下进行
3．细胞核组分可以被用来进行电泳迁移率变动分析实验去研究转录因子或活体外转录反应
4．获得细胞浆成分，可以采取不同离心速度：最低不得低于10000g（或10000rpm例如EPPENDORF 5415D），由此获得的便是粗提细胞浆组分；根据用户需求，增加离心速度，其纯度相应增加，最高不要超过速度为120000g
5．所有组分建议保存在－70℃冰箱里，长期保持活性
6．本产品保留所有细胞内成分
7．本产品的分离成分可用于各种后续操作
8．本公司提供系列亚细胞分离和分析试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶
3．本产品经鉴定亚细胞结构分离清晰，维持正常活性

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号            名称            规格
G&VS10005.3    植物样品亚细胞结构分离试剂盒        10次
G&VS10005.3A     清理液（Reagent A）            毫升
G&VS10005.3B     平衡液（Reagent B）            毫升
G&VS10005.3C     胞壁分离液（Reagent C）        毫升
G&VS10005.3D     胞核分离液（Reagent D）        毫升
G&VS10005.3E     保存液（Reagent E）            毫升

试剂盒订购信息
产品编号            名称        规格
G&VS10005.1    细胞样品亚细胞结构分离试剂盒    10次
G&VS10005.2    组织样品亚细胞结构分离试剂盒    10次
G&VS10005.3    植物样品亚细胞结构分离试剂盒    10次
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G&VS10041.2    内质网形态高质染色试剂盒    20次
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G&VS10100    动物细胞核分离试剂盒    50次
G&VS10117    细胞微管分离试剂盒        10次
G&VS10118    细胞溶酶体分离试剂盒    10次
G&VS10119    细胞过氧化酶体分离试剂盒    10次
G&VS10121    细胞溶酶体形态染色试剂盒    20次