BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒产品说明书

主要用途
BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂是一种旨在使用标准化的化学分离石蜡 方法和免疫荧光染色技术，分析经过 BrdU  标记预处理(即使用溴脱氧尿嘧啶核苷替代脱氧胸腺嘧啶核苷 整合到组织中合成的 DNA 链)的存档中的石蜡包埋组织切片， 其 DNA 合成水平的权威而经典的技术方法。 该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种 BrdU 标记预处理的动物组织(动物、 人体、植物等)的 DNA  合成分析。广泛用于细胞衰老、细胞凋亡的研究。产品严格无菌，即到即用，反 应敏感，操作简捷，性能稳定，荧光清晰。

技术背景
溴脱氧尿嘧啶核苷(5－bromo－2－deoxyuridine；BrdU)是 DNA 前体胸腺嘧啶核苷类似物，通过竞争掺 入 DNA 合成期(S 期)细胞单链 DNA 核苷酸序列替代胸腺嘧啶。由于组织细胞内无内源性 BrdU 存在， 应用 BrdU  与胸腺嘧啶竞争掺入的强度，来分析细胞增殖状况，包括增殖细胞的种类，增殖速度等细胞动 力学问题。自 82 年 Gratzer 制备出抗 BrdU 单抗及标记检测技术后， 应用BrdU 标记的敏感性已与氘胸腺嘧 啶核苷(3H-TdR) 相似， 而成为取代同位素的非放射性标记物之一。通常使用免疫组化方法定量或定性检 测其标记，反映细胞繁殖、细胞周期和 DNA 合成以及含量等。

产品内容    
去石蜡液(Reagent A)        毫升
补水液 A  (Reagent B)    毫升
补水液 B  (Reagent C)    毫升
补水液 C  (Reagent D)    毫升
补水液 D  (Reagent E)    毫升
清理液(Reagent F)        毫升
封阻液(Reagent G)        毫升
抗体液(Reagent H)        毫升
染色液(Reagent I)        毫升
复染液(Reagent J)        毫升
抗淬灭液(Reagent K)        微升
产品说明书        1 份

保存方式    
保存 封阻液(Reagent G)、抗体液(Reagent H)、染色液(Reagent I)、复染液(Reagent J)和 抗淬灭液(Reagent K)在－20C冰箱里， 其余的保存在 4C冰箱里； 抗体液(Reagent H)和 染色液(Reagent I)严禁反复冻融； 染色液(Reagent I)、复染液(Reagent J)和 抗淬灭液(Reagent K)避免光照；有效保证 6 月

用户自备
盖玻片：用于封片孵育
小型染色缸：用于去石蜡处理
培养箱：用于组织细胞染色孵育
荧光显微镜：用于组织细胞荧光观察

实验步骤
一、  去石蜡处理
1． 取出 10 片待测的 3 至 5 微米厚的石蜡包埋的组织切片(注意： 石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4C 条件下，固定16  小时，此步很重要)
2 ．  放进 80C烘箱，孵育 30 分钟
3 ．  室温下静置 15 分钟
4 ．  按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸            孵育时间
毫升 去石蜡液(Reagent A)    15 分钟
毫升 去石蜡液(Reagent A)    15 分钟
毫升 去石蜡液(Reagent A)    15 分钟
毫升 补水液 A  (Reagent B)    3 分钟
毫升 补水液 B  (Reagent C)    3 分钟
毫升 补水液 C  (Reagent D)    3 分钟
毫升 补水液 D  (Reagent E)    3 分钟
5 ．  小心移去切片上的 补水液 D  (Reagent E)
6 ．  小心加上 xx 微升 清理液(Reagent F) 在切片上，铺满整个切片样品表面
7 ．  小心移去切片上的 清理液(Reagent F)

二、  免疫染色处理
实验开始前，将－20C冰箱里试剂盒中的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作：
8 ．  加入 xx 微升 封阻液(Reagent G)，铺满载玻片培养表面
9 ．  置于 37C培养箱里孵育 30 分钟，保持湿润
10．小心抽去 封阻液(Reagent G)
11．加入 xx 微升 抗体液(Reagent H)，铺满载玻片培养表面
12．盖上盖玻片，置于 37C培养箱里孵育 30 分钟(注意： 避免气泡)
13．小心移去盖玻片，抽去 抗体液(Reagent H)
14．加入 xx 微升 清理液(Reagent F)，铺满载玻片培养表面
15．置于 45C培养箱里孵育 5 分钟，保持湿润
16．小心抽去 清理液(Reagent F)
17．重复实验步 14 至 16 二次
18．加入 xx 微升 染色液(Reagent I)，铺满载玻片培养表面
19．盖上新的盖玻片，置于 37C培养箱里孵育 30 分钟，避免光照(注意： 避免气泡)
20．小心移去盖玻片，抽去 染色液(Reagent I)
21．加入 xx 微升 清理液(Reagent F)，铺满载玻片培养表面
22．置于 45C培养箱里孵育 5 分钟，保持湿润
23．小心抽去 清理液(Reagent F)
24．重复实验步 21 至 23 二次
25．加入 xx 微升 复染液(Reagent J)，铺满载玻片培养表面
26．室温下孵育 3 分钟，避免光照
27．小心抽去 复染液(Reagent J)
28．加入 xx 微升 抗淬灭液(Reagent K)
29．盖上盖玻片或封片
30．即刻在荧光显微镜下观察
    染色液(Reagent I)    复染液(Reagent J)
荧光染料    异硫氰酸荧光素(FITC)    二咪基联苯基吲哚(DAPI)
荧光颜色    绿色        蓝色
激发波长    488        350
散发波长    530        460
作用    BrdU 显示        核显示

注意事项
1 ．  本产品为 10 次操作量
2 ．  在整个操作过程中须戴手套，以防污染
3 ．  动物 BrdU 标记预处理――方法一： 30 微克 BrdU/克动物体重， 静脉注射， 1 小时后， 手术取出组织或 方法二： 先手术取出组织， 浸泡在 BrdU 液体里，37C孵育 60 分钟， 清洗数次； 然后进行切片处理(建 议使用 溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液－G&VS12194
4 ．  石蜡包埋前，组织切片须用 10％甲醛 4C条件下，固定 16 小时，否则造成样品支离破碎
5 ．  每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光
6 ．  试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
7 ．  孵育时，须避免光照
8 ．  建议组织细胞染色完成后，即刻进行荧光显微镜观察。如果放进 4C冰箱里待测，不要超过 3 天
9 ．  本公司提供系列细胞凋亡和衰老检测试剂产品

质量标准
1 ．  本产品经鉴定性能稳定
2 ．  本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回， 经检验确系产品质量所致， 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ，  RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
编号            名称                    规格
G&VS10034.3    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒     10 次
G&VS80034.3A    去石蜡液(Reagent A)                    500  毫升
G&VS80034.3B    补水液 A  (Reagent B)                500 毫升
G&VS80034.3C    补水液 B  (Reagent C)                500 毫升
G&VS80034.3D    补水液 C  (Reagent D)                500 毫升
G&VS80034.3E    补水液 D  (Reagent E)                500 毫升
G&VS10034.3F    清理液(Reagent F)                    500 毫升
G&VS10034.3G    封阻液(Reagent G)                    50 毫升
G&VS10034.3H    抗体液(Reagent H)                    10 毫升
G&VS10034.3I    染色液(Reagent I)                    10 毫升
G&VS10034.3J    复染液(Reagent J)                    10 毫升
G&VS10034.3K    抗淬灭液(Reagent K)                    10 毫升
G&VS12194    溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)溶液                1 毫升

产品编号            名称                    规格
G&VS10021. 1    通用型细胞周期流式细胞分析试剂盒            100 次
G&VS10021.2    细胞周期蓝色荧光流式细胞分析试剂盒(紫外波长，无需固定和透膜处理)    100 次
G&VS10021.3    细胞周期碘化丙啶(PROPIDIUM IODIDE) 红色荧光流式细胞分析试剂盒    100 次
G&VS10033    BrdU 标记法细胞繁殖流式细胞仪检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034. 1    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.2    BrdU 标记法组织冰冻切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.3    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖荧光显微镜检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.4    BrdU 标记法载玻片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.5    BrdU 标记法组织冰冻切片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10034.6    BrdU 标记法组织石蜡切片细胞繁殖 NBT 显色检测试剂盒    10/20 次
G&VS10012. 1    细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    100/250 次
G&VS10012.2    全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10 次
G&VS10012.3    冰冻切片组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    50 次
G&VS10012.4    通用型组织/细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒    10/100 次
G&VS30072    P16 蛋白表达西方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS30073    P21 蛋白表达西方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS20104    P16 基因表达北方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS20105    P21 基因表达北方杂交分析试剂盒    5 次
G&VS20106. 1    端粒酶活性 TRAP 电泳分析试剂盒    10 次
G&VS20106.2    端粒酶活性 TRAP 实时定量检测试剂盒    20 次
G&VS20107    人体 hTERT 表达实时定量检测试剂盒    20 次
G&VS20024.23    人体 hTERT 基因甲基化检测试剂盒    20 次
G&VS10037. 1    动物细胞 β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒    20 次
G&VS10037.2    动物细胞 β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒    20 次