CAT#:JW-5-759
常温运输和保存

PCI混合液（pH4.5，25:24:1，RNA提取专用）

产品及特点
本产品是苯酚-氯仿-异戊醇（Phenol-Chloroform-Isoamyl Alcohol,PCI）的25:24:1的混合液，pH偏酸性，用于RNA提取时去除蛋白质、多糖、脂类和酚类等杂质。本产品不能用于DNA提取。
RNA纯化时苯酚的作用是使裂解液中的蛋白质变性，同时抑制RNase对RNA的降解作用。用苯酚处理裂解液时，由于蛋白分子表面的很多极性基团与苯酚相似相溶，故蛋白分子溶于酚相，而RNA溶于水相，从而将RNA和蛋白质分开。氯仿的作用是让水和酚彻底分开，不互溶，彻底去除水相中的残留苯酚，从水溶液中沉淀得到的RNA就没有酚污染。异戊醇的作用是降低表面张力，从而减少操作过程（常常有震荡步骤）中气泡的产生，而这些气泡的表面张力可能会使RNA断裂。另外，异戊醇还有助于水相和酚相分相，使离心后的上层水相（含RNA）、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定，便于移取上清。

规格及成分
本产品采用大立盒包装
成分                                                                          编号    规格        包装
PCI混合液（pH4.5，25:24:1，RNA提取专用）    5-759    250 mL    250 mL棕色玻璃瓶
使用手册                                                            5-759sc    1份          无

运输及保存
常温运输和保存，有效期为12个月。

自备试剂
如果用于沉淀法回收RNA，则需要无水乙醇或异丙醇、3M RNase-free乙酸钠溶液 pH5.2、RNase-free 75%乙醇和RNase-free水（或DEPC水）。如果用于过柱法回收RNA，则需要硅胶模离心吸附柱，上柱液，洗柱液和RNase-free水（或DEPC水）。

使用方法
该试剂为RNA提取过程中的常用试剂，使用方法参考分子克隆手册等参考书，或实验室SOP。下列操作仅以0.5mL样本供参考。

一、沉淀法：
1.将0.5mL含RNA的细胞裂解液，或含有RNA、DNA、蛋白质、脂类的混合液转移到1.5mL RNase-free塑料离心管中。
2.加入等体积的本产品，即0.5mL。
3.涡旋震荡2分钟。
4.常温13000g离心5分钟，溶液将呈两层相。将含有RNA的无色水相转移到一个新的RNase-free离心管中，剩下的有机相将呈蓝色。两相的相对位置跟样本比重有关，并不是任何时候无色水相都在上层。如果样本含盐浓度高，比重大，也可能在下层。
5.在上清中加入0.1倍体积的3M RNase-free乙酸钠溶液，pH5.2和两倍体积的自备无水乙醇（两倍体积的乙醇可以用一倍体积的异丙醇替代），颠倒10次充分混匀。
6.常温13000g离心15分钟。
7.小心弃上清，不要触及管底离心面的沉淀。
8.加入1mL RNase-free 75%乙醇，颠倒10次。
9.常温13000g离心3分钟。
10.小心弃上清后短暂离心30秒，去掉残留的液体（约50uL）。
11.室温敞开盖子两分钟。
12.加入DEPC水或RNase-free水溶解RNA，然后进行浓度测定、电泳，RT-PCR等后续检测。

二、过柱法：
13.将0.5mL含RNA的细胞裂解液，或含有RNA、DNA、蛋白质、脂类的混合液转移到1.5mL RNase-free塑料离心管中。
14.加入等体积的本产品，即0.5mL。
15.涡旋震荡2分钟。
16.常温13000g离心5分钟，溶液将呈两层相。将含有RNA的无色水相转移到一个新的RNase-free离心管中，剩下的有机相将呈蓝色。两相的相对位置跟样本比重有关，并不是任何时候无色水相都在上层。如果样本含盐浓度高，比重大，也可能在下层。
17.在上清中加入1-2倍体积的自备上柱液，所用体积跟所用上柱液的配方相关。
18.颠倒混匀，取0.7mL混合液上柱。
19.常温13000g离心半分钟，弃穿透液。
20.再取0.7mL样本-上柱液混合液上同一个柱子。
21.常温13000g离心半分钟，弃穿透液。
22.重复第20-第21步，直到混合液全部上柱。
23.加入0.7mL洗柱液。
24.常温13000g离心半分钟，弃穿透液。
25.重复第23-第24步一次。
26.不加任何溶液，将吸附柱离心半分钟。
27.在吸附柱中加入30-50uL的DEPC水或RNase-free水，室温放置2分钟后，将吸附柱放入一个新的1.5mL离心管中，13000g离心半分钟，收集的穿透液就是纯化的RNA溶液。
28.对所得的RNA溶液进行浓度测定、电泳，RT-PCR等后续检测。

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