CAT#:JW-7-C67-56-1
低温运输，-20℃保存

甲醇含量测定试剂盒

产品及特点    
本产品是用于检测甲醇（Methanol ，CAS: 67-56-1）含量的试剂盒。其原  理是甲醇被醇氧化酶催化生成甲醛。之后甲醛又与 4-氨基-3-肼基-5-巯基-1，2， 4-三唑反应生成紫红色物质，该紫红色物质在 550 nm 下有特征光吸收，通过测  定反应过程中产物吸光度的变化，可以间接计算甲醇的含量，来测定甲醇的含量。 本产品有如下特点：
1.   即开即用，使用便捷，用户不需要优化条件，只需准备待测样本。
2.   提供甲醇阳性对照。
3.   灵敏度高，最低检测限为 x  μM。
4.   可以定量，线性范围在 y  μM-z μM之间。
5.   提供标准曲线法和消光系数法两种操作流程。
6.   本产品足够 100 次 1  mL 体系的比色皿检测或 400 次 250  μL 体系的 96 孔板检测。
7.   本产品只可用于科研。

规格及成分    本产品采用小扁盒包装
成份        编号        规格    包装
甲醇含量测定反应液    7-C67-56-1r    125 mL    125 mL 本色瓶
甲醇含量测定显色液    7-C67-56-1c    50 mL    50 mL 棕色瓶
10 mM 甲醇溶液    C67-56-1A    1 mL    1.5 mL 本色管
醇氧化酶干粉    7-C67-56-1e    100 T    1.5 mL 红盖管
使用手册        7-C67-56-1sc    1份    无

运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：待测样品，超纯水， 比色皿或96 孔板及与之匹配的分光光度计。

使用方法    
一、首次使用本试剂盒时配制下列溶液
1.   配制醇氧化酶液：将 1 mL 甲醇含量测定反应液加入到装有醇氧化干粉的管 中，颠倒摇晃 20 次溶解，得醇氧化酶液，放冰上待用。没有用完的本溶液 需要放-20℃或更低温度保存。
二、制备待测样本
2.   用自备试剂制备待测样品。
三、标准曲线法 1 mL 体系比色皿测定
3.   开机预热分光光度计并用超纯水调零后待用。
4.   标记 1-6 号共 6 个 1.5 mL 塑料离心管。
5.   使用梯度稀释法，用本试剂盒提供的甲醇含量测定反应液将 10 mM 甲醇溶 液配制一组浓度分别为  1 mM、750 μM、500 μM、250 μM、 100 μM 和 0 μM 的甲醇梯度稀释液（一下简称标曲梯度液）。
6.   设置反应 。如果有 N 个待测样本，每个做 1 次重复，则需要设置 N+7 个反 应多出的 6 个用于标准曲线制备，另外一个用做阴性对照。在 N+7 个 1.5 mL 离心管中按下表分别加入各成份：
成份        N 个待测样本管    阴性对照        1-6 号标曲管
甲醇含量测定反应液    各 430 μL        430 μL        各 430 μL
N 个待测样本    各 100 μL        不加        不加
标曲梯度液    不加        不加        各 100 μL 到对应的 1-6 号标曲管
醇氧化酶液    20 μL        20 μL        20 μL
        混合均匀 37℃保温 10 min
甲醇含量测定显色液    各 450 μL        450 μL        各 450 μL
        震荡混匀，30℃下反应30 min
    7.   冷却到室温后迅速使用分光光度计测定每个样本在 550 nm 的光吸收读数， 测前用超纯水调零，共得 N+7 个读数。

四、数据处理
8.   计算真实 OD550 光吸收：每个样本测得的光吸收减去阴性对照的光吸收即 为每个样本的光吸收。共 N+6 个读数。
9.   制备标准曲线：以甲醇溶液的浓度为横轴，以其真实 OD550 光吸收为纵轴， 绘制标准曲线。
10. 将 N 个待测样品的 OD550 值带入标准曲线方程，即可计算出每个待测样品 中的甲醇的浓度。
五、96 孔板检测
11. 同上，只是所有反应体系按比例缩小使得终体积跟酶标用多孔板板兼容，最 后在 550 nm 测定光吸收
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