CAT#:JW-211243-50
常温运输和保存

病毒 RNA 提取试剂盒（过柱法）

产品及特点    
本产品专门用于从血清(血浆或脑脊液)、病毒拭子保存液、培养基等液 体样品中提取微量病毒 RNA 的产品 ，它具有下列特点：
1.   操作简单快捷 ，整个过程只需要 30 分钟左右。
2.   灵敏度高 ，通过 RT-PCR 检测到的灵敏度最高可以达到 50 拷贝/mL （根 PCR 条件相关）。
3.   安全无毒 ，不需要使用苯酚和氯仿等有机溶液。
4.   一般一次可以处理 0.2mL 样品 。如果加上病毒离心富集步骤 ，最多可 以处理 1.5 mL 样品。
5.   得到的 RNA 可以用于后续的 RT-PCR 和荧光定量 RT-PCR。
6.   价廉物美 ，性价比远低于国外同类产品。
7.   适用于各种材料 ，包括血清、血浆、脑脊液、尿液、 粪便、 培养细胞 上清液等无细胞材料。
8.   本产品只能用于科研。
规格及成分        
成份        编号    包装    包装材料        
病毒裂解液    211244    30 mL    30mL 本色瓶    
核酸挂柱液    211245    40 mL    60mL 本色瓶
离心吸附柱    211207    50 套    塑料袋
通用洗柱液    60408    50 mL    60mL 本色瓶
RNA 洗脱液    71207    10 mL    10mL 本色瓶
使用手册        211243sc    1 份    无
运输及保存：常温运输和保存 ，RNA 病毒裂解液长期（ 1 周） 放置需放 4 ℃ ,  有效期一 年。
自备试剂：无

使用方法    
1.   如果有 N 个样品 ，标记 N+2 个 1.5-2mL 螺旋盖塑料离心管 ，多出的 一个为阳性对照 ，一个为阴性对照 。为避免污染 ，建议不要使用压盖 式塑料离心管 。在做标记时 ，最好标出向心面或离心面 ， 以便在后续 离心后取上清时 不会把沉淀丢失。
2.   各加入 0.2 mL 液体样品（血清、血浆、尿液、脑脊液、唾液、眼泪等 等）。
2.1、   如果是口腔拭子、 咽喉拭子等各种拭子样品 ， 则将拭子放入
0.2mL 自备生理盐水中挤压出液体，然后取 0.2mL 进行提取。
2.2、   如果是粪便等半固定样品 ， 则取约 0.3mL 的样品 ， 加入 0,3自备生理盐水 ，震荡重悬 ，离心取 0.2mL 上清进行提取。
2.3、   如果血液 ，细胞培养液等含细胞的液体 ，可以离心用上清 ，也 可以直接取用，但后者提取的 RNA 中有细胞的基因组 DNA 污 染 。血浆的抗凝剂必须是 EDTA 或 ACD ， 不能是肝素 。使用 ACD 时由于所加入 ACD 会增加体积，样品会被稀释，得到的 病毒滴度会比使用 EDTA 低 15%左右 。血浆最好按 0.6mL/ 管的量分装保存 ， 以避免反复冻融。
2.4、   如果样品是实体组织或培养细胞 ，则需要在自备生理盐水中匀 浆后离心 ， 用 0.2mL 上清液（含病毒） 进行提取 ，但此种情 况下最后得到的 RNA 不可避免的会含有基因组 DNA 污染。
2.5、   如果是病毒样品保存液或病毒采样管 ，则直接取用 0.2mL 保 存液。
2.6、   如果液体样品中的病毒需要富集 ，可以使用 1.5 mL 上述方法  得到的液体在 4 ℃ 24,000 g 冷冻离心 60 分钟, 移弃 1.3 mL、 用剩下的 0.2mL 继续操作。
3.   加入 0.6 mL 病毒裂解液 ，振荡 30 秒混匀 。注意 ：病毒裂解液在 4 ℃ 放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在 65℃水浴使沉淀彻底溶解并 充分摇匀后再取用。
4.   室温放置 10 分钟。
5.   加入 0.8mL 上柱结合液到离心管中 ， 颠倒混匀后转移一半的混合液 （0.8 mL） 到离心吸附柱中。
6.   室温放置 2 分钟后 12,000 rpm 室温离心 1 分钟 ，弃收集管中的穿透 液 ，把离心吸附柱放回到收集管中。
7.   将剩余的另外一半裂解液（0.8mL）转移到离心吸附柱中。
8.   室温放置 2 分钟后 12,000 rpm 室温离心 1 分钟 ，弃收集管中的穿透 液 ，把离心吸附柱放回到收集管中。
9.   加入 0.7 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中 ， 12,000 rmp 室温离心 1 分钟 ，弃收集管中的穿透液 ，把离心吸附柱放回到收集管中。
10. 加入 0.3 mL 通用洗柱液到离心吸附柱中 ， 12,000 rmp 室温离心 1 分钟 ，弃收集管中的穿透液 ，把离心吸附柱放回到收集管中 。 此步为第二次洗涤 ，可以跳过。
11.  12000 g 室温离心半分钟 ，去掉离心吸附柱中残留的液体。
12. 在离心吸附柱的滤膜的中部加入 30-50 uL RNA 洗脱液 ，然后将离心 吸附柱套入一新的 1.5 mL 离心管中.
13. 室温放置 2 分钟后 12000 g 室温离心 1 分钟，离心管中收集的样品即 为 RNA。
14.  RNA 样品可以直接用于 RT-PCR 或逆转录反应 ，也可放-80℃长期保 存。
关联产品：病毒 DNA 提取试剂（过柱法）